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吃面包

金虫 (初入文坛)

[求助] 植物叶片硝酸还原酶活性测定中测试样吸光值比对照低,是什么原因

用 李合生主编.植物生理生化实验原理和技术.2000. 中的离体法测植物叶片硝酸还原酶活性,测试样(加NADH)吸光值总是低于对照(不加NADH,用pH 7.5的磷酸缓冲液代替)是什么原因?测试样和对照吸光值在0.1左右都偏低,差值在0.07左右。
配制试剂时EDTA用EDTA-Na代替,NADH用NADH-Na2代替了,其他都和实验指导书上一样。
做了几次都是这样的情况,望高手指点,急。。。
非常感谢。。
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stefwong

新虫 (初入文坛)

我不知道是不是不同物种需要采用不用的方法

拟南芥和玉米用这个离体法就没这问题,当然,NADH是现配现用的,其他的提取液都是长期室温储存。
但番茄就会出现lz说的问题,加NADH就测不出,用活体法测就没问题。

我看有篇文献说,NADH对水稻和小麦这样的高等植物有不可逆的钝化作用,不知是否它们就不宜用离体法测。
6楼2015-05-11 11:03:05
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普通回帖

taojia7560

木虫 (正式写手)

请问楼主问题解决没有,最近也在测,同样的问题

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
平凡
2楼2013-10-02 08:49:36
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13436

新虫 (初入文坛)

★ ★
lqf808: 金币+2, 应该当天配当天测。 2014-07-20 21:16:35
同样结果,到目前为止做了五次实验都是对照高于实验组,看到一个方法上的注意事项写着:配好的KNO 3 磷酸缓冲液应密闭低温保存,否则易滋生微生物将NO 3- 还原,使对照吸光值偏高。http://www.biomart.cn/experiment/430/574/575/578/21861.htm。昨天做了一遍低温保存,依然对照高于实验组。还未找到原因,望与楼主和2楼沟通,探讨。
@taojia7560   @吃面包
3楼2014-04-14 09:17:41
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alito

金虫 (小有名气)

同求,昨天做的还没问题。今天就一堆比对照低的。最后用水做的对照。想在用实验中的对照跟水比一下。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-07-17 19:01:18
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lqf808

至尊木虫 (著名写手)

都市农夫

昨天做的还没问题,今天就一堆比对照低的。
说明配好的KNO 3 磷酸缓冲液应密闭低温保存,否则24h后易滋生微生物将NO 3- 还原,使对照吸光值偏高.
应该当天配当天测。
5楼2014-07-20 21:15:51
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不死的小强x

新虫 (初入文坛)

内容已删除
7楼2015-09-11 08:59:23
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尘埃落定zcb

银虫 (初入文坛)

不知楼主现在找到原因了吗?我测了两回也都是对照高于处理
哈哈哈
8楼2015-12-03 15:25:55
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尘埃落定zcb

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 不死的小强x at 2015-09-11 08:59:23
我也遇到这种情况,标曲R的方有4个9.但是酶活总是测不出来,我的对照和反应组都加酶液,只是对照组不加NADH。反应30min后再加磺胺和萘胺,然后需要好几个小时才会出现一点粉红色。但是对照组反而都能出现 ...

你最后找到原因了吗,我现在和你是一样的情况,测了两回了,都是对照组高于处理,求指导
哈哈哈
9楼2015-12-03 15:29:18
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尘埃落定zcb

银虫 (初入文坛)

同求原因啊,我也是测了两回都是对照组高于处理组,不知道啥原因
哈哈哈
10楼2015-12-03 15:30:05
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