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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 作物 » 植物叶片硝酸还原酶活性测定中测试样吸光值比对照低，是什么原因
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吃面包

金虫 (初入文坛)

[求助] 植物叶片硝酸还原酶活性测定中测试样吸光值比对照低，是什么原因

用 李合生主编.植物生理生化实验原理和技术.2000. 中的离体法测植物叶片硝酸还原酶活性，测试样（加NADH）吸光值总是低于对照（不加NADH，用pH 7.5的磷酸缓冲液代替）是什么原因？测试样和对照吸光值在0.1左右都偏低，差值在0.07左右。
配制试剂时EDTA用EDTA-Na代替，NADH用NADH-Na2代替了，其他都和实验指导书上一样。
做了几次都是这样的情况，望高手指点，急。。。
非常感谢。。
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小虫来了，加油！
1楼 2013-06-06 13:08:36
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stefwong

新虫 (初入文坛)
我不知道是不是不同物种需要采用不用的方法

拟南芥和玉米用这个离体法就没这问题，当然，NADH是现配现用的，其他的提取液都是长期室温储存。
但番茄就会出现lz说的问题，加NADH就测不出，用活体法测就没问题。

我看有篇文献说，NADH对水稻和小麦这样的高等植物有不可逆的钝化作用，不知是否它们就不宜用离体法测。
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6楼2015-05-11 11:03:05
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taojia7560

木虫 (正式写手)
请问楼主问题解决没有，最近也在测，同样的问题

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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平凡
2楼2013-10-02 08:49:36
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13436

新虫 (初入文坛)
★ ★
lqf808: 金币+2, 应该当天配当天测。 2014-07-20 21:16:35
同样结果，到目前为止做了五次实验都是对照高于实验组，看到一个方法上的注意事项写着：配好的KNO 3 磷酸缓冲液应密闭低温保存，否则易滋生微生物将NO 3－ 还原，使对照吸光值偏高。http://www.biomart.cn/experiment/430/574/575/578/21861.htm。昨天做了一遍低温保存，依然对照高于实验组。还未找到原因，望与楼主和2楼沟通，探讨。
@taojia7560   @吃面包
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3楼2014-04-14 09:17:41
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alito

金虫 (小有名气)
同求，昨天做的还没问题。今天就一堆比对照低的。最后用水做的对照。想在用实验中的对照跟水比一下。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2014-07-17 19:01:18
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lqf808

至尊木虫 (著名写手)

都市农夫
昨天做的还没问题，今天就一堆比对照低的。
说明配好的KNO 3 磷酸缓冲液应密闭低温保存,否则24h后易滋生微生物将NO 3－ 还原，使对照吸光值偏高.
应该当天配当天测。
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5楼2014-07-20 21:15:51
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不死的小强x

新虫 (初入文坛)
内容已删除
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7楼2015-09-11 08:59:23
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尘埃落定zcb

银虫 (初入文坛)
不知楼主现在找到原因了吗？我测了两回也都是对照高于处理
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哈哈哈
8楼2015-12-03 15:25:55
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尘埃落定zcb

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 不死的小强x at 2015-09-11 08:59:23
我也遇到这种情况，标曲R的方有4个9.但是酶活总是测不出来，我的对照和反应组都加酶液，只是对照组不加NADH。反应30min后再加磺胺和萘胺，然后需要好几个小时才会出现一点粉红色。但是对照组反而都能出现 ...

你最后找到原因了吗，我现在和你是一样的情况，测了两回了，都是对照组高于处理，求指导
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哈哈哈
9楼2015-12-03 15:29:18
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尘埃落定zcb

银虫 (初入文坛)
同求原因啊，我也是测了两回都是对照组高于处理组，不知道啥原因
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哈哈哈
10楼2015-12-03 15:30:05
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