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开始2012

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR堵孔堵死我了~妈妈的~~~

最近做PCR，模板为8Kbp左右质粒，PCR目的条带为5Kbp，电泳使用1%的胶。做了好几次，每次都堵孔求高手指教原因最近运气很背啊
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那些还飞翔着，不可思议的梦！
1楼 2013-05-30 18:41:55
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
开始2012(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-31 10:48:15
5Kbp的目的条带,用1%的胶,你就不能用小一点的吗???


琼脂糖凝胶浓度（%）        线状DNA分子分离范围（kb）
0.3        5--60
0.6        1--20
0.9        0.5--7
1.2        0.4--6
1.5        0.2--3
2.0        0.1—2
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2楼2013-05-30 19:23:17
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yanfang2012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
开始2012(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-31 10:48:28
不太明白你的说的堵孔是什么情况，如果是胶浓度大的话，最多跑的慢，我开始做的时候有好多次都是跑完之后发现只在加样孔有亮光，不知道你说的是不是这种情况
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believe yourself！
3楼2013-05-31 09:51:16
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lf6220

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by yanfang2012 at 2013-05-31 09:51:16
不太明白你的说的堵孔是什么情况，如果是胶浓度大的话，最多跑的慢，我开始做的时候有好多次都是跑完之后发现只在加样孔有亮光，不知道你说的是不是这种情况

不知道你的上样多少，你可以降低上样量看看，1%的胶是没有问题的
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4楼2013-05-31 14:02:20
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liygmail

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
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开始2012(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 23:17:23
切胶回收时，胶要切得尽可能小，减少非必要胶块，按说明书所述加适量溶胶液，待溶胶完全后，上回收吸附柱，一般没有问题，如果堵孔，可分两个吸附柱上柱
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5楼2013-05-31 21:00:23
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yxncas-2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的样品应该是有问题吧！堵孔，就是电泳不能跑进胶里那种情况，感觉是不是你的成分有什么问题，导致跑不进！
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6楼2013-06-01 23:07:51
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