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开始2012

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR堵孔堵死我了~妈妈的~~~

最近做PCR,模板为8Kbp左右质粒,PCR目的条带为5Kbp,电泳使用1%的胶。做了好几次,每次都堵孔求高手指教原因最近运气很背啊
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那些还飞翔着,不可思议的梦!
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yanfang2012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
开始2012(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-31 10:48:28
不太明白你的说的堵孔是什么情况,如果是胶浓度大的话,最多跑的慢,我开始做的时候有好多次都是跑完之后发现只在加样孔有亮光,不知道你说的是不是这种情况
believe yourself!
3楼2013-05-31 09:51:16
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
开始2012(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-31 10:48:15
5Kbp的目的条带,用1%的胶,你就不能用小一点的吗???


琼脂糖凝胶浓度(%)        线状DNA分子分离范围(kb)
0.3        5--60
0.6        1--20
0.9        0.5--7
1.2        0.4--6
1.5        0.2--3
2.0        0.1—2
2楼2013-05-30 19:23:17
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lf6220

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by yanfang2012 at 2013-05-31 09:51:16
不太明白你的说的堵孔是什么情况,如果是胶浓度大的话,最多跑的慢,我开始做的时候有好多次都是跑完之后发现只在加样孔有亮光,不知道你说的是不是这种情况

不知道你的上样多少,你可以降低上样量看看,1%的胶是没有问题的
4楼2013-05-31 14:02:20
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liygmail

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
开始2012(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 23:17:23
切胶回收时,胶要切得尽可能小,减少非必要胶块,按说明书所述加适量溶胶液,待溶胶完全后,上回收吸附柱,一般没有问题,如果堵孔,可分两个吸附柱上柱
5楼2013-05-31 21:00:23
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