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zd0017

铁虫 (小有名气)

[求助] 求指导!!!分子生物学大牛请进!!!!

我从pEGFP-C3载体上把neo抗性基因扩下来连到pMD18-T载体上后,转DH5α,转化子在amp和km抗性的板上都长了克隆,就是neo抗性的板上没有长克隆,不知道为什么???跪求指导,还是我该用G418筛选啊!!!非常感谢!!!
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zd0017(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-30 22:00:48
什么是Neo抗性的平板?
Neo抗性在原核中一般用ka筛选,在真核细胞种用G418筛选。
4楼2013-05-30 21:04:17
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cyu1987

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zd0017(myprayer代发): 金币+1, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one\'s purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-05-30 18:51:18
确定引物没问题么?PCR是否突变了?是否移码? 把你AMP和KM板上的菌落去测序看看。既然是抗性筛选,没长出来多半是你连上去的抗性片段有问题。
2楼2013-05-30 17:22:07
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zd0017

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cyu1987 at 2013-05-30 17:22:07
确定引物没问题么?PCR是否突变了?是否移码? 把你AMP和KM板上的菌落去测序看看。既然是抗性筛选,没长出来多半是你连上去的抗性片段有问题。

应该不是移码,这个基因是既有km抗性和neo抗性的,不知道为什么用km筛可以,而新霉素不可以……
3楼2013-05-30 20:50:47
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zd0017

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 酶切专家 at 2013-05-30 21:04:17
什么是Neo抗性的平板?
Neo抗性在原核中一般用ka筛选,在真核细胞种用G418筛选。

谢谢你的回复,我就是有点搞不明白既然这个基因有这两种抗生素的抗性,为什么我扩的抗性基因只在ka抗性板上生长,而在新霉素抗性的板上没有长呢,今天验证了下pEGFP-c3,这个在两个抗性平板上都能生长啊!!非常感谢您的指导!!!
5楼2013-05-31 09:48:03
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