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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求指导！！！分子生物学大牛请进！！！！
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zd0017

铁虫 (小有名气)

[求助] 求指导！！！分子生物学大牛请进！！！！

我从pEGFP-C3载体上把neo抗性基因扩下来连到pMD18-T载体上后，转DH5α，转化子在amp和km抗性的板上都长了克隆，就是neo抗性的板上没有长克隆，不知道为什么？？？跪求指导，还是我该用G418筛选啊！！！非常感谢！！！
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1楼 2013-05-30 15:29:17
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zd0017

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cyu1987 at 2013-05-30 17:22:07
确定引物没问题么？PCR是否突变了？是否移码？ 把你AMP和KM板上的菌落去测序看看。既然是抗性筛选，没长出来多半是你连上去的抗性片段有问题。

应该不是移码，这个基因是既有km抗性和neo抗性的，不知道为什么用km筛可以，而新霉素不可以……
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3楼2013-05-30 20:50:47
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cyu1987

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zd0017(myprayer代发): 金币+1, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one\'s purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-05-30 18:51:18
确定引物没问题么？PCR是否突变了？是否移码？ 把你AMP和KM板上的菌落去测序看看。既然是抗性筛选，没长出来多半是你连上去的抗性片段有问题。
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2楼2013-05-30 17:22:07
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zd0017(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-30 22:00:48
什么是Neo抗性的平板？
Neo抗性在原核中一般用ka筛选，在真核细胞种用G418筛选。
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4楼2013-05-30 21:04:17
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zd0017

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 酶切专家 at 2013-05-30 21:04:17
什么是Neo抗性的平板？
Neo抗性在原核中一般用ka筛选，在真核细胞种用G418筛选。

谢谢你的回复，我就是有点搞不明白既然这个基因有这两种抗生素的抗性，为什么我扩的抗性基因只在ka抗性板上生长，而在新霉素抗性的板上没有长呢，今天验证了下pEGFP-c3,这个在两个抗性平板上都能生长啊！！非常感谢您的指导！！！
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5楼2013-05-31 09:48:03
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