应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求指导！！！分子生物学大牛请进！！！！
51/1返回列表
查看: 712  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zd0017

铁虫 (小有名气)

[求助] 求指导！！！分子生物学大牛请进！！！！

我从pEGFP-C3载体上把neo抗性基因扩下来连到pMD18-T载体上后，转DH5α，转化子在amp和km抗性的板上都长了克隆，就是neo抗性的板上没有长克隆，不知道为什么？？？跪求指导，还是我该用G418筛选啊！！！非常感谢！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-30 15:29:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cyu1987

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zd0017(myprayer代发): 金币+1, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one\'s purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-05-30 18:51:18
确定引物没问题么？PCR是否突变了？是否移码？ 把你AMP和KM板上的菌落去测序看看。既然是抗性筛选，没长出来多半是你连上去的抗性片段有问题。
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-30 17:22:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zd0017

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cyu1987 at 2013-05-30 17:22:07
确定引物没问题么？PCR是否突变了？是否移码？ 把你AMP和KM板上的菌落去测序看看。既然是抗性筛选，没长出来多半是你连上去的抗性片段有问题。

应该不是移码，这个基因是既有km抗性和neo抗性的，不知道为什么用km筛可以，而新霉素不可以……
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-30 20:50:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zd0017(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-30 22:00:48
什么是Neo抗性的平板？
Neo抗性在原核中一般用ka筛选，在真核细胞种用G418筛选。
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-30 21:04:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zd0017

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 酶切专家 at 2013-05-30 21:04:17
什么是Neo抗性的平板？
Neo抗性在原核中一般用ka筛选，在真核细胞种用G418筛选。

谢谢你的回复，我就是有点搞不明白既然这个基因有这两种抗生素的抗性，为什么我扩的抗性基因只在ka抗性板上生长，而在新霉素抗性的板上没有长呢，今天验证了下pEGFP-c3,这个在两个抗性平板上都能生长啊！！非常感谢您的指导！！！
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-31 09:48:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zd0017 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 08工科求调剂290分 +8 1314捧花 2026-04-02 11/550 2026-04-09 00:39 by chixmc
[考研] 334求调剂 +13 Riot2025 2026-04-08 14/700 2026-04-09 00:12 by lature00
[考研] 085600材料与化工，求调剂 +6 won_qii 2026-04-07 6/300 2026-04-08 21:57 by hypershenger
[考研] 0703化学求调剂 +16 不知名的小卅 2026-04-08 16/800 2026-04-08 21:53 by 旺旺豆包
[考研] 296求调剂 +6 汪！？！ 2026-04-08 6/300 2026-04-08 21:38 by 朱云虎202
[考研] 电子信息346 +4 zuoshaodian 2026-04-08 4/200 2026-04-08 11:54 by zzucheup
[考研] 336求调剂，一志愿中科大 +9 墨彧 yuyu 2026-04-06 9/450 2026-04-08 11:24 by 想读书的菌菌
[考研] 材料调剂 +13 汉123456 2026-04-07 14/700 2026-04-07 22:53 by 来看流星雨10
[考研] 材料调剂 +17 小刘同学吖吖 2026-04-06 18/900 2026-04-07 11:41 by 诗与自由
[考研] 一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂 +13 努力奋斗112 2026-04-04 13/650 2026-04-06 07:13 by jj987
[考研] 0703求调剂383分 +9 W55j 2026-04-03 9/450 2026-04-06 06:50 by houyaoxu
[考研] 338求调剂 +7 晟功? 2026-04-03 7/350 2026-04-04 20:37 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +4 是可乐不是可乐 2026-04-04 4/200 2026-04-04 19:41 by 唐沐儿
[考研] 复试调剂 +6 范根培 2026-04-04 6/300 2026-04-04 14:27 by 土木硕士招生
[考研] 22408，264求调剂 +3 ywh729 2026-04-03 4/200 2026-04-04 11:04 by ywh729
[考研] 考研调剂 +3 15615482637 2026-04-03 3/150 2026-04-03 22:50 by ms629
[考研] 求调剂 +8 akdhjs 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by 戴维ING
[考研] 土木水利328分求调剂 +6 疾风知劲草666 2026-04-02 6/300 2026-04-03 11:38 by znian
[考研] 262求调剂 +6 励志一定发文章 2026-04-02 7/350 2026-04-03 09:54 by linyelide
[考研] 295求调剂 +7 愿旅途永远坦然 2026-04-02 7/350 2026-04-03 08:22 by fangshan711
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭