应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求指导！！！分子生物学大牛请进！！！！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 704  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zd0017

铁虫 (小有名气)

[求助] 求指导！！！分子生物学大牛请进！！！！

我从pEGFP-C3载体上把neo抗性基因扩下来连到pMD18-T载体上后，转DH5α，转化子在amp和km抗性的板上都长了克隆，就是neo抗性的板上没有长克隆，不知道为什么？？？跪求指导，还是我该用G418筛选啊！！！非常感谢！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-30 15:29:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cyu1987

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zd0017(myprayer代发): 金币+1, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one\'s purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-05-30 18:51:18
确定引物没问题么？PCR是否突变了？是否移码？ 把你AMP和KM板上的菌落去测序看看。既然是抗性筛选，没长出来多半是你连上去的抗性片段有问题。
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-30 17:22:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zd0017

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cyu1987 at 2013-05-30 17:22:07
确定引物没问题么？PCR是否突变了？是否移码？ 把你AMP和KM板上的菌落去测序看看。既然是抗性筛选，没长出来多半是你连上去的抗性片段有问题。

应该不是移码，这个基因是既有km抗性和neo抗性的，不知道为什么用km筛可以，而新霉素不可以……
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-30 20:50:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zd0017(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-30 22:00:48
什么是Neo抗性的平板？
Neo抗性在原核中一般用ka筛选，在真核细胞种用G418筛选。
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-30 21:04:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zd0017

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 酶切专家 at 2013-05-30 21:04:17
什么是Neo抗性的平板？
Neo抗性在原核中一般用ka筛选，在真核细胞种用G418筛选。

谢谢你的回复，我就是有点搞不明白既然这个基因有这两种抗生素的抗性，为什么我扩的抗性基因只在ka抗性板上生长，而在新霉素抗性的板上没有长呢，今天验证了下pEGFP-c3,这个在两个抗性平板上都能生长啊！！非常感谢您的指导！！！
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-31 09:48:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zd0017 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +11 梵@@ 2026-04-06 11/550 2026-04-07 09:33 by lovelychen
[考研] 工科 22408 267求推荐 +4 wanwan00 2026-04-05 5/250 2026-04-06 22:47 by chenzhimin
[考研] 一志愿生物与医药，296分，求调剂 +11 66鹿 2026-04-03 13/650 2026-04-06 21:45 by 52305043001
[考研] 338求调剂 +4 我想上岸ii 2026-04-05 4/200 2026-04-06 21:04 by 木子君1218
[考研] 材料专硕322 +11 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-05 11/550 2026-04-06 14:07 by lqwchd
[考研] 324求调剂 +3 k可乐 2026-04-05 4/200 2026-04-06 09:54 by 蓝云思雨
[考研] 复试调剂 +8 春日来信- 2026-04-03 8/400 2026-04-05 18:58 by 蓝云思雨
[考研] 271分求调剂学校 +12 zph158488！ 2026-04-02 13/650 2026-04-05 10:13 by lqwchd
[考研] 男生，一志愿沪9生物学071000，初试308求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-04 3/150 2026-04-05 08:26 by barlinike
[考研] 286求调剂 +3 草木不言 2026-04-04 3/150 2026-04-04 22:40 by lbsjt
[考研] 085600调剂 +4 1amJJ 2026-04-02 4/200 2026-04-04 21:53 by hemengdong
[考研] 085601，一志愿厦大334复试被刷求调剂 +13 曾仰之 2026-04-03 15/750 2026-04-04 20:13 by dongzh2009
[考研] [调剂信息]085408光电信息 求调剂 总分291分数一英一 +3 iz11az 2026-04-02 3/150 2026-04-04 19:09 by 蓝云思雨
[考研] 材料专业383求调剂 +8 郭阳阳阳成 2026-04-03 8/400 2026-04-04 10:29 by Rednal.
[基金申请] esi高被引论文是不是能对中标有所加分和帮助呢 +5 redcom 2026-04-01 6/300 2026-04-03 15:15 by Howard28
[考研] 315分 085602 求调剂 +15 26考研上岸版26 2026-04-02 15/750 2026-04-03 12:45 by xingguangj
[考研] 325分化学调剂 +5 15771691647 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:58 by ChemPharm
[考研] 262求调剂 +6 励志一定发文章 2026-04-02 7/350 2026-04-03 09:54 by linyelide
[考研] 化学工程专硕324分，一志愿中国矿业大学求调剂 +7 耿耿1314 2026-04-01 7/350 2026-04-02 07:40 by 尚水阁主
[考研] 296求调剂 +4 汪！？！ 2026-03-31 7/350 2026-04-01 22:04 by 客尔美德
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭