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秦运杰223

铜虫 (正式写手)

[求助] 免疫共沉淀---免疫复合物最后分离

免疫共沉淀与免疫沉淀有什么区别?另外免疫共沉淀 的实验原理前面的基本都理解可是到最后抗原抗体复合物与免疫磁珠Protein A/G结合后怎么只把抗原洗脱掉,使抗原与抗体分离?免疫沉淀试验本实验室里没有人做过,东西也都没有,目前正在做准备工作,还请虫友们多多指教,包括实验步骤,注意事项要求等等,谢谢大家!!
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
秦运杰223: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-06-03 16:06:20
免疫共沉淀与免疫沉淀有什么区别?
--> 假设有A,B两个蛋白,免疫共沉淀是指通过A抗体把B富集出来(如果A, B可以互作).  免疫沉淀是指用A抗体富集A.

另外免疫共沉淀 的实验原理前面的基本都理解可是到最后抗原抗体复合物与免疫磁珠Protein A/G结合后怎么只把抗原洗脱掉,使抗原与抗体分离?
--> 看你的后续试验步骤,  有用酸性缓冲液的. 如果是做WB的话, 有时你甚至可以直接用SDS.

免疫沉淀试验本实验室里没有人做过,东西也都没有,目前正在做准备工作,还请虫友们多多指教,包括实验步骤,注意事项要求等等,谢谢大家!!
--> 第一次做的话, 先要搞清楚 1), 抗体可不可以用, 2), 抗体特异性是否达标, 3) 蛋白在操作过程中会不会降解. 这几点对试验结果的判断很重要. 建议一些关键的步骤后面都留一点样品以便分析.
3楼2013-06-01 16:14:28
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myfinalway

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
蛋白上样buffer洗脱
2楼2013-06-01 15:44:33
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