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守望者047

金虫 (小有名气)

[交流] PCR产物跑电泳除目标带外还有一条很稳定的非特异带，而且。。

PCR产物跑电泳除目标带外还有一条很稳定的非特异带，而且。。每次PCR后电泳总会出现，即使目标带不出现它也出现，特别纯特别亮的条带，我都有把它也切下来测序的冲动了，哪位同仁知道神马原因产生的这种情况，真的，特别稳定，PS：在Blast的时候显示这对引物是特异的
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1楼 2013-05-29 16:37:39
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bullfrog325

木虫 (正式写手)
★
守望者047: 金币+1, 不给金币感觉别扭，谢谢了，追加悬赏1个 2013-05-30 09:37:33
很好奇, 那就测吧!
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2楼2013-05-29 16:46:59
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白翠

银虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
守望者047: 金币+1, 谢谢，有这种可能 2013-05-30 09:36:51
会不会是引物二聚体呢，条带长度是多少，可以查一下。
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3楼2013-05-29 17:39:04
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
守望者047: 金币+1, 谢谢关注，已经重新设计跑了，只是好奇这个稳定的条带 2013-05-30 09:38:58
“PS：在Blast的时候显示这对引物是特异的” 不代表实际PCR时就不产生非特异条带，
你可以看一下你的基因有没有选择性剪切，或者你重新设计对引物再跑试试
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4楼2013-05-29 17:44:23
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
守望者047: 金币+1, 谢谢关注，测序回来再说，反正样品有的是 2013-05-30 09:41:08
守望者047(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-30 09:42:53
咋说呢。。。
可能的情况很多
引物不特异 正好 样品里面有可以扩增的条带；
目的基因多拷贝，引物位置是保守的等等
你先测序看看吧 。
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5楼2013-05-29 19:06:05
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hzlatqh

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
守望者047: 金币+1, 图很简单，左右是Marker，中间三个孔每列两个带，上面大分子量的是目的条带，下面更亮的是我说的稳定的非特异带 2013-05-30 09:44:09
上图看看吧 现在大家只能猜
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6楼2013-05-30 02:07:35
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守望者047

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-05-29 16:46:59
很好奇, 那就测吧!

有道理，谢谢了
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7楼2013-05-30 09:35:30
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