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[求助]
求教武汉大学的同志 关于水稻花粉RNA的提取
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关于水稻花粉RNA的提取 听说取花粉是穿着军大衣在-40度冰箱里！真的是这样吗？ 花粉量如此之少取得急死人 还请赐教如此少材料的RNA如何提取 |
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亚先4楼2013-06-06 11:07:05
志子
至尊木虫 (文坛精英)
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- 专业: 高分子组装与超分子结构
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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1.水稻单核花粉分离： 筛选好的材料剪成3~4cm长的小段，加入15%蔗糖溶液，组织破碎机打碎，依次通过150、50、30微米滤膜，15%蔗糖溶液冲洗30微米滤膜，收集膜上花粉，密度梯度离心，1000rpm 10min。吸取特点界面处花粉，2500rpm，4℃离心5min收集沉淀。 2.水稻二核花粉分离： 筛选好的花药加入15%蔗糖溶液，玻璃棒轻捣让花粉散出，依次通过50、30微米滤膜，15%蔗糖溶液冲洗微米滤膜，收集膜上花粉，密度梯度离心，1000rpm 10min。吸取特点界面处花粉，2000rpm，4℃离心5min收集沉淀。 3.水稻三核花粉分离： 筛选好的花药加入45%蔗糖溶液，玻璃棒轻捣让花粉散出，依次通过60、35微米滤膜，45%蔗糖溶液冲洗微米滤膜，收集膜上花粉，直接2500rpm，4℃离心5min收集沉淀。 4.镜检： lei HC显微镜观测分离好的各期花粉大小、花粉壁、细胞内含物和杂质。含0.1% Triton的DAPI染色观察细胞核，FDA染色观察细胞活力。 5.RNA提取： 分离得到的花粉用RNeasy Plant Mini Kit提取RNA，琼脂糖凝胶电泳检测提取的RNA。 |
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2楼2013-05-29 01:23:26
非常感谢 3楼2013-05-29 11:17:38
5楼2013-06-08 13:14:39
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