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亚先

银虫 (小有名气)

[求助] 求教武汉大学的同志 关于水稻花粉RNA的提取

关于水稻花粉RNA的提取 听说取花粉是穿着军大衣在-40度冰箱里！真的是这样吗？ 花粉量如此之少取得急死人 还请赐教如此少材料的RNA如何提取
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说到做到这就是我的忍道
1楼 2013-05-28 10:47:24
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志子

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.水稻单核花粉分离：
筛选好的材料剪成3~4cm长的小段，加入15%蔗糖溶液，组织破碎机打碎，依次通过150、50、30微米滤膜，15%蔗糖溶液冲洗30微米滤膜，收集膜上花粉，密度梯度离心，1000rpm 10min。吸取特点界面处花粉，2500rpm，4℃离心5min收集沉淀。
2.水稻二核花粉分离：
筛选好的花药加入15%蔗糖溶液，玻璃棒轻捣让花粉散出，依次通过50、30微米滤膜，15%蔗糖溶液冲洗微米滤膜，收集膜上花粉，密度梯度离心，1000rpm 10min。吸取特点界面处花粉，2000rpm，4℃离心5min收集沉淀。
3.水稻三核花粉分离：
筛选好的花药加入45%蔗糖溶液，玻璃棒轻捣让花粉散出，依次通过60、35微米滤膜，45%蔗糖溶液冲洗微米滤膜，收集膜上花粉，直接2500rpm，4℃离心5min收集沉淀。
4.镜检：
lei HC显微镜观测分离好的各期花粉大小、花粉壁、细胞内含物和杂质。含0.1% Triton的DAPI染色观察细胞核，FDA染色观察细胞活力。
5.RNA提取：
分离得到的花粉用RNeasy Plant Mini Kit提取RNA，琼脂糖凝胶电泳检测提取的RNA。
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亚先
2楼2013-05-29 01:23:26
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亚先

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 志子 at 2013-05-29 01:23:26
1.水稻单核花粉分离：
筛选好的材料剪成3~4cm长的小段，加入15%蔗糖溶液，组织破碎机打碎，依次通过150、50、30微米滤膜，15%蔗糖溶液冲洗30微米滤膜，收集膜上花粉，密度梯度离心，1000rpm 10min。吸取特点界面处 ...

非常感谢
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说到做到这就是我的忍道
3楼2013-05-29 11:17:38
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智齿1221

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 亚先 at 2013-05-29 11:17:38
非常感谢...

为啥 ~  我们这边的提取方法完全不同呢！
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亚先
4楼2013-06-06 11:07:05
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亚先

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 智齿1221 at 2013-06-06 11:07:05
为啥 ~  我们这边的提取方法完全不同呢！...

哇 那你们是怎么提的呢？
赞一下 回复此楼
说到做到这就是我的忍道
5楼2013-06-08 13:14:39
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loudbing

禁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
亚先: 金币+7, ★有帮助 2013-08-24 13:25:15
本帖内容被屏蔽
6楼2013-08-05 11:05:43
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