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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 为什么分子量相差这么大的蛋白过SephadexG100不能分开呢？？？
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yexuejun01

木虫 (小有名气)

[求助] 为什么分子量相差这么大的蛋白过SephadexG100不能分开呢？？？

本人采用了SephadexG100来分离纯化蛋白，但发现相对分子质量相差这么大的蛋白既然一起出来，真是郁闷。。
为什么分子量相差这么大的蛋白过SephadexG100不能分开呢？？？
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1楼 2013-05-27 15:09:53
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yexuejun01: 金币+5, ★有帮助, 谢谢你的帮助 2013-05-27 15:49:32
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析 2013-05-28 07:43:10
我想到两个可能, 一是降解, 这个可能不大因为是这样的话你会发现目标蛋白大小有变化. 二是非特异结合, 小的蛋白是和你的目标蛋白相互作用一起出现的. 针对只一点你可以调整缓冲液的配方.
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2楼2013-05-27 15:31:21
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yexuejun01

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-05-27 15:31:21
我想到两个可能, 一是降解, 这个可能不大因为是这样的话你会发现目标蛋白大小有变化. 二是非特异结合, 小的蛋白是和你的目标蛋白相互作用一起出现的. 针对只一点你可以调整缓冲液的配方.

非常感谢你的帮助，我现在也怀疑是非特异结合，调整缓冲液的配方是更改缓冲液还是调整缓冲液的浓度或pH呢
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3楼2013-05-27 15:49:05
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bullfrog325

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yexuejun01 at 2013-05-27 15:49:05
非常感谢你的帮助，我现在也怀疑是非特异结合，调整缓冲液的配方是更改缓冲液还是调整缓冲液的浓度或pH呢...

这个要摸索条件了, 一般是加大盐浓度和洗涤剂的浓度看看先.
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4楼2013-05-27 16:02:57
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edoz1986

新虫 (小有名气)
你的蛋白可能有聚体，buffer（sec buffer 和 电泳上样buffer） 里面有dtt吗？
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5楼2013-05-31 13:00:04
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yexuejun01

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by edoz1986 at 2013-05-31 13:00:04
你的蛋白可能有聚体，buffer（sec buffer 和 电泳上样buffer） 里面有dtt吗？

这个我已排除这种可能
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6楼2013-06-02 11:13:09
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