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maliyuan0924

铁虫 (小有名气)


[交流] 马血清的成分与牛血清的不同

马血清的成分与牛血清的不同?
培养细胞为什么加胰岛素?
我没有养过细胞只是在文献里看到的想学习一下
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
myprayer: 回帖置顶 2013-05-30 10:21:03
maliyuan0924: 金币+1 2013-06-16 20:56:44
养细胞一般用的都是胎牛血清,没有听过你说的那个血清。
还有你说的加胰岛素,一般都是家青霉素和链霉素的,胰岛素针对特定的细胞吧。
这是之前养过的细胞,你可以参考一下。
消化法原代培养兔胸主动脉平滑肌细胞
用DMEM配0.2%的1型胶原酶(用20的血清的DMEM配可能更好,有类似文献),分装于青霉素小并,每并2-3ml。1只免的胸主动脉置于1 瓶消化液中消化,消化约10几个小时(消化程度的把握要体会),离心后,接种(若见细胞量大,成功把握大),绝对静置3天(没必要看,看多了无益),8天可传代。
犬胸主动脉平滑肌贴块法—— 方法成熟,比消化法好控制的多。
1、取材过程要快,取好放4度储存的D-hanks液带入超净台,不然先天不足;
2、块大小密度影响不是很大(尽量小),关键是边缘要尽量整齐,选用快刀快剪;
3、一定要贴牢,翻瓶时间个人不一,有3-5小时的,也有贴块直接翻瓶的,关键还是贴牢,另外在贴牢的基础上尽量早接触培液,可以在剪块的时候加少量培液略湿润,镊子夹块到培养瓶后,用吸管之类的细长工具将块均匀铺好,加刚好覆盖组织块的培养液量(25cm2培养瓶大概2ml),半小时到一小时内就可翻瓶,动作要轻,从培养瓶一角试着翻,如果块飘起,则再过会翻;
4、贴块无内膜外膜面之分,亦无需刮除内膜,若内膜面向下,会有少量内皮细胞爬出组织块,但只要平滑肌细胞一旦爬出来,内皮细胞生长自然不占优势,会因为平滑肌细胞大量爬出、增殖而漂起来,换液可洗掉,另外传代可纯化平滑肌细胞。
5、培液Gibco的 DMEM(高糖4500mg/L)加四季清新生牛血清20%。
建议用1次性培养瓶,成功机会大于玻璃瓶。成功后再小心过度成玻璃瓶。块愈小愈好。用新刀,快,损伤小。全过程越短越好。组织块的边缘不齐整也不是什么很关键的问题,最重要的是组织块要尽量小,尽量能剪成小米粒大小;另外就是组织块要贴牢,其关键就是培养液可以在6小时后翻瓶的时间再加,这样就可以避免组织块贴不牢而悬浮起来的尴尬了。
期待可以帮到你
3楼2013-05-30 10:20:44
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战歌2008

银虫 (小有名气)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
maliyuan0924: 金币+1 2013-06-16 20:56:37
大多数细胞是用胎牛血清。但也有的细胞要求用小牛血清,马血清什么的。至于成分的差别那我就不清楚了。胰岛素,有的细胞是要求加胰岛素的,肯定是这个细胞需要。除了胰岛素,还有很多其它添加物。根据细胞的要求。不过绝大多数细胞都是基础培养基加血清就好了。另外不建议加双抗。
4楼2013-05-30 13:27:01
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pupablue

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by myprayer at 2013-05-30 10:20:44
养细胞一般用的都是胎牛血清,没有听过你说的那个血清。
还有你说的加胰岛素,一般都是家青霉素和链霉素的,胰岛素针对特定的细胞吧。
这是之前养过的细胞,你可以参考一下。
消化法原代培养兔胸主动脉平滑肌细胞 ...

像你这种不知道答案就瞎回复一通的渣子,害臊不害臊
5楼2015-03-09 16:18:02
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简单回复
2013-05-25 21:00   回复  
myprayer: 金币-1, 请勿单纯表情回复。。。下不为例,谢谢合作, 2013-05-30 10:15:44
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