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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 马血清的成分与牛血清的不同
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maliyuan0924

铁虫 (小有名气)

[交流] 马血清的成分与牛血清的不同

马血清的成分与牛血清的不同？
培养细胞为什么加胰岛素？
我没有养过细胞只是在文献里看到的想学习一下
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1楼2013-05-25 10:19:09
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回帖置顶 ( 共有1个 )

myprayer

专家顾问 (著名写手)
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myprayer: 回帖置顶 2013-05-30 10:21:03
maliyuan0924: 金币+1 2013-06-16 20:56:44
养细胞一般用的都是胎牛血清，没有听过你说的那个血清。
还有你说的加胰岛素，一般都是家青霉素和链霉素的，胰岛素针对特定的细胞吧。
这是之前养过的细胞，你可以参考一下。
消化法原代培养兔胸主动脉平滑肌细胞
用DMEM配0.2%的1型胶原酶（用20的血清的DMEM配可能更好，有类似文献），分装于青霉素小并，每并2-3ml。1只免的胸主动脉置于1 瓶消化液中消化，消化约10几个小时（消化程度的把握要体会），离心后，接种（若见细胞量大，成功把握大），绝对静置3天（没必要看，看多了无益），8天可传代。
犬胸主动脉平滑肌贴块法—— 方法成熟，比消化法好控制的多。
1、取材过程要快，取好放4度储存的D-hanks液带入超净台，不然先天不足；
2、块大小密度影响不是很大（尽量小），关键是边缘要尽量整齐，选用快刀快剪；
3、一定要贴牢，翻瓶时间个人不一，有3－5小时的，也有贴块直接翻瓶的，关键还是贴牢，另外在贴牢的基础上尽量早接触培液，可以在剪块的时候加少量培液略湿润，镊子夹块到培养瓶后，用吸管之类的细长工具将块均匀铺好，加刚好覆盖组织块的培养液量（25cm2培养瓶大概2ml），半小时到一小时内就可翻瓶，动作要轻，从培养瓶一角试着翻，如果块飘起，则再过会翻；
4、贴块无内膜外膜面之分，亦无需刮除内膜，若内膜面向下，会有少量内皮细胞爬出组织块，但只要平滑肌细胞一旦爬出来，内皮细胞生长自然不占优势，会因为平滑肌细胞大量爬出、增殖而漂起来，换液可洗掉，另外传代可纯化平滑肌细胞。
5、培液Gibco的 DMEM（高糖4500mg/L）加四季清新生牛血清20%。
建议用1次性培养瓶，成功机会大于玻璃瓶。成功后再小心过度成玻璃瓶。块愈小愈好。用新刀，快，损伤小。全过程越短越好。组织块的边缘不齐整也不是什么很关键的问题，最重要的是组织块要尽量小，尽量能剪成小米粒大小；另外就是组织块要贴牢，其关键就是培养液可以在6小时后翻瓶的时间再加，这样就可以避免组织块贴不牢而悬浮起来的尴尬了。
期待可以帮到你
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3楼2013-05-30 10:20:44
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战歌2008

银虫 (小有名气)
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maliyuan0924: 金币+1 2013-06-16 20:56:37
大多数细胞是用胎牛血清。但也有的细胞要求用小牛血清，马血清什么的。至于成分的差别那我就不清楚了。胰岛素，有的细胞是要求加胰岛素的，肯定是这个细胞需要。除了胰岛素，还有很多其它添加物。根据细胞的要求。不过绝大多数细胞都是基础培养基加血清就好了。另外不建议加双抗。
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4楼2013-05-30 13:27:01
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pupablue

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
3楼: Originally posted by myprayer at 2013-05-30 10:20:44
养细胞一般用的都是胎牛血清，没有听过你说的那个血清。
还有你说的加胰岛素，一般都是家青霉素和链霉素的，胰岛素针对特定的细胞吧。
这是之前养过的细胞，你可以参考一下。
消化法原代培养兔胸主动脉平滑肌细胞 ...

像你这种不知道答案就瞎回复一通的渣子，害臊不害臊
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5楼2015-03-09 16:18:02
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yingying15882楼
2013-05-25 21:00   回复  
myprayer: 金币-1, 请勿单纯表情回复。。。下不为例，谢谢合作， 2013-05-30 10:15:44
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