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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助35S promoter 后面连接gDNA 还是cDNA
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dcb005

金虫 (著名写手)

[交流] 求助35S promoter 后面连接gDNA 还是cDNA

求助大牛解惑。最近在构建过表达载体，用的是35S启动子，请问35S启动子后面接基因组DNA(含内含子)可以么？确实见有paper 用的是gDNA, 会自动切掉introns 么？
我一直感觉35s后面接的是cDNA，请高手解惑！非常感谢
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1楼 2013-05-24 14:59:16
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bullfrog325

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+2, 鼓励发帖应助！ 2013-05-24 21:38:59
dcb005: 金币+4, 谢谢 2013-05-27 16:25:32
楼主应该用CDNA.
虽然在道理上一旦转录出来下面的剪切会自动发生,
但是, 转录的效率是和剪切有些关系的, 启动子不一样造成的转录强度说不准会影响最终RNA的序列.
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2楼2013-05-24 15:23:04
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gzl9901

铁杆木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
努力，再努力！再创佳绩！
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3楼2013-05-24 15:32:34
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dcb005

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-05-24 15:23:04
楼主应该用CDNA.
虽然在道理上一旦转录出来下面的剪切会自动发生,
但是, 转录的效率是和剪切有些关系的, 启动子不一样造成的转录强度说不准会影响最终RNA的序列.

比较烦人的是，有些gene的gDNA 起作用， cDNA 不起作用
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4楼2013-05-24 16:02:47
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bullfrog325

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主能再多描述些么, "不起作用"意思是不是没有过量表达预想的表型? 不起作用那些测过表达量没? 和接gDNA的表达量比较如何?
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5楼2013-05-24 17:06:36
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zgb1982

木虫 (正式写手)
我觉得都可以
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6楼2013-05-24 19:55:51
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asdry

木虫 (职业作家)
祝楼主诸事顺利，心想事成！
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7楼2013-05-24 20:24:28
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Renavatio

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gDNA和cDNA理论上都是可行的，如果基因大小只有2k左右可以考虑直接连gDNA，但太大的话，还是连cDNA比较好
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8楼2013-05-24 23:07:59
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dcb005

金虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-05-24 17:06:36
楼主能再多描述些么, "不起作用"意思是不是没有过量表达预想的表型? 不起作用那些测过表达量没? 和接gDNA的表达量比较如何?

表达水平有，但不能complement 相应突变体，但gDNA转化的可以互补。你们连接过gDNA在35S启动子后么？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2013-05-25 08:46:08
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dcb005

金虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Renavatio at 2013-05-24 23:07:59
gDNA和cDNA理论上都是可行的，如果基因大小只有2k左右可以考虑直接连gDNA，但太大的话，还是连cDNA比较好

你们连过gDNA在35s 启动子后面吗？成功了么？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2013-05-25 08:47:29
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natureding

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也碰到了gdna可以互补表型，但是cdna不行。什么原因呢？
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11楼2014-05-28 11:01:36
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
表示关注，我也不懂
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12楼2014-05-28 12:18:16
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shefu1204

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我都试过，都可以，用cDNA好些
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13楼2015-01-26 22:17:08
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