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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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dcb005

金虫 (著名写手)


[交流] 求助35S promoter 后面连接gDNA 还是cDNA

求助大牛解惑。最近在构建过表达载体,用的是35S启动子,请问35S启动子后面接基因组DNA(含内含子)可以么?确实见有paper 用的是gDNA, 会自动切掉introns 么?
我一直感觉35s后面接的是cDNA,请高手解惑!非常感谢
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bullfrog325

木虫 (正式写手)


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amisking: 金币+2, 鼓励发帖应助! 2013-05-24 21:38:59
dcb005: 金币+4, 谢谢 2013-05-27 16:25:32
楼主应该用CDNA.
虽然在道理上一旦转录出来下面的剪切会自动发生,
但是, 转录的效率是和剪切有些关系的, 启动子不一样造成的转录强度说不准会影响最终RNA的序列.
2楼2013-05-24 15:23:04
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gzl9901

铁杆木虫 (文坛精英)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
努力,再努力!再创佳绩!
3楼2013-05-24 15:32:34
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dcb005

金虫 (著名写手)


引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-05-24 15:23:04
楼主应该用CDNA.
虽然在道理上一旦转录出来下面的剪切会自动发生,
但是, 转录的效率是和剪切有些关系的, 启动子不一样造成的转录强度说不准会影响最终RNA的序列.

比较烦人的是,有些gene的gDNA 起作用, cDNA 不起作用
4楼2013-05-24 16:02:47
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bullfrog325

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主能再多描述些么, "不起作用"意思是不是没有过量表达预想的表型? 不起作用那些测过表达量没? 和接gDNA的表达量比较如何?
5楼2013-05-24 17:06:36
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zgb1982

木虫 (正式写手)


我觉得都可以
6楼2013-05-24 19:55:51
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asdry

木虫 (职业作家)


祝楼主诸事顺利,心想事成!
7楼2013-05-24 20:24:28
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Renavatio

木虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gDNA和cDNA理论上都是可行的,如果基因大小只有2k左右可以考虑直接连gDNA,但太大的话,还是连cDNA比较好
8楼2013-05-24 23:07:59
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dcb005

金虫 (著名写手)


引用回帖:
5楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-05-24 17:06:36
楼主能再多描述些么, "不起作用"意思是不是没有过量表达预想的表型? 不起作用那些测过表达量没? 和接gDNA的表达量比较如何?

表达水平有,但不能complement 相应突变体,但gDNA转化的可以互补。你们连接过gDNA在35S启动子后么?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
9楼2013-05-25 08:46:08
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dcb005

金虫 (著名写手)


引用回帖:
8楼: Originally posted by Renavatio at 2013-05-24 23:07:59
gDNA和cDNA理论上都是可行的,如果基因大小只有2k左右可以考虑直接连gDNA,但太大的话,还是连cDNA比较好

你们连过gDNA在35s 启动子后面吗?成功了么?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
10楼2013-05-25 08:47:29
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natureding

银虫 (正式写手)



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我也碰到了gdna可以互补表型,但是cdna不行。什么原因呢?
11楼2014-05-28 11:01:36
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
表示关注,我也不懂
12楼2014-05-28 12:18:16
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shefu1204

铁虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我都试过,都可以,用cDNA好些
13楼2015-01-26 22:17:08
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