应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物设计
71/1返回列表
查看: 786  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] 引物设计

请问各位前辈，根据近缘种属设计的引物用于反转录已获得cDNA的第一链是不是不可以加酶切位点啊？
回复此楼

» 猜你喜欢
每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
1楼 2013-05-21 10:03:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-22 01:00:31
1949stone: 金币+1, 同意 2013-05-22 08:21:41
崔永霞: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢！ 2013-05-22 09:25:06
最好先不加酶切位点，等基因扩增出来后再设计包含酶切位点的引物，这样做出来的几率大点，毕竟你是根据近缘种属设计的引物去做反转录。
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-21 20:48:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

崔永霞

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-05-21 20:48:20
最好先不加酶切位点，等基因扩增出来后再设计包含酶切位点的引物，这样做出来的几率大点，毕竟你是根据近缘种属设计的引物去做反转录。

首先感谢前辈的指点，我刚开始做这块有点陌生。那如果我有这个酶的全长cDNA序列，（是同一个物种，但不是同一个品种），是不是可以根据这个cDNA序列设计引物，然后反转录呢？因为同源比对的话，我在NCBI近缘种属里面只找到两个序列，我觉得两个序列比对时不是不可靠？
赞一下 回复此楼
每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
3楼2013-05-22 09:24:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
崔永霞: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2013-05-22 12:34:36
引用回帖:
3楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-05-22 09:24:19
首先感谢前辈的指点，我刚开始做这块有点陌生。那如果我有这个酶的全长cDNA序列，（是同一个物种，但不是同一个品种），是不是可以根据这个cDNA序列设计引物，然后反转录呢？因为同源比对的话，我在NCBI近缘种属里 ...

可以试试，有希望P出来，做这种实验看运气。
还有一个方法，就是找不同来源的这种酶，分析序列，看看有没有保守序列，然后根据保守序列设计引物去扩增。
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-22 10:22:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

崔永霞

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-05-22 10:22:40
可以试试，有希望P出来，做这种实验看运气。
还有一个方法，就是找不同来源的这种酶，分析序列，看看有没有保守序列，然后根据保守序列设计引物去扩增。...

前辈你好，再弱弱的问一句，一般一个具有催化活性的酶，那个区域是最保守的？
赞一下 回复此楼
每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
5楼2013-05-22 12:38:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-05-22 12:38:06
前辈你好，再弱弱的问一句，一般一个具有催化活性的酶，那个区域是最保守的？...

不一定的，每类酶都有自己的特点，而且有些酶除了催化位点外，几乎没有保守性。你先查查自己酶是否有保守区域。
赞一下 回复此楼
6楼2013-05-22 18:28:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

崔永霞

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-05-22 18:28:15
不一定的，每类酶都有自己的特点，而且有些酶除了催化位点外，几乎没有保守性。你先查查自己酶是否有保守区域。...

哦，那查这个酶的保守区域和比对序列找保守区域有什么不同吗？
赞一下 回复此楼
每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
7楼2013-05-22 20:09:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 崔永霞 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 3/150 2026-09-01 01:40 by o3EMxHUAQDtS
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 3/150 2026-08-31 22:12 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭