应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物设计
51/1返回列表
查看: 788  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] 引物设计

请问各位前辈，根据近缘种属设计的引物用于反转录已获得cDNA的第一链是不是不可以加酶切位点啊？
回复此楼

» 猜你喜欢
每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
1楼 2013-05-21 10:03:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

崔永霞

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-05-22 18:28:15
不一定的，每类酶都有自己的特点，而且有些酶除了催化位点外，几乎没有保守性。你先查查自己酶是否有保守区域。...

哦，那查这个酶的保守区域和比对序列找保守区域有什么不同吗？
赞一下 回复此楼
每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
7楼2013-05-22 20:09:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-22 01:00:31
1949stone: 金币+1, 同意 2013-05-22 08:21:41
崔永霞: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢！ 2013-05-22 09:25:06
最好先不加酶切位点，等基因扩增出来后再设计包含酶切位点的引物，这样做出来的几率大点，毕竟你是根据近缘种属设计的引物去做反转录。
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-21 20:48:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

崔永霞

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-05-21 20:48:20
最好先不加酶切位点，等基因扩增出来后再设计包含酶切位点的引物，这样做出来的几率大点，毕竟你是根据近缘种属设计的引物去做反转录。

首先感谢前辈的指点，我刚开始做这块有点陌生。那如果我有这个酶的全长cDNA序列，（是同一个物种，但不是同一个品种），是不是可以根据这个cDNA序列设计引物，然后反转录呢？因为同源比对的话，我在NCBI近缘种属里面只找到两个序列，我觉得两个序列比对时不是不可靠？
赞一下 回复此楼
每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
3楼2013-05-22 09:24:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
崔永霞: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2013-05-22 12:34:36
引用回帖:
3楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-05-22 09:24:19
首先感谢前辈的指点，我刚开始做这块有点陌生。那如果我有这个酶的全长cDNA序列，（是同一个物种，但不是同一个品种），是不是可以根据这个cDNA序列设计引物，然后反转录呢？因为同源比对的话，我在NCBI近缘种属里 ...

可以试试，有希望P出来，做这种实验看运气。
还有一个方法，就是找不同来源的这种酶，分析序列，看看有没有保守序列，然后根据保守序列设计引物去扩增。
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-22 10:22:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+3 Tsingking1 2026-08-27 14/700 2026-09-01 08:29 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭