应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于DNase1 去除提取的RNA中基因组DNA的问题
52/1返回列表
查看: 9397  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小妞116

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于DNase1 去除提取的RNA中基因组DNA的问题 已有2人参与

从细胞中提取的RNA,逆转录后PCR，没有转染质粒的细胞也总是可以扩增出我的目的条带，这是什么原因？
还有就是通过DNase1 可以去除基因组DNA吗？去除后可以直接逆转录吗，还是得纯化后逆转录，那TAKARA的说明书实在是太复杂了。貌似第三步去除了基因组DNA后，第四步又开始了纯化，实在是没明白，求助大侠帮忙啊！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-05-16 17:46:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxkhhh

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

其实残留的基因组DNA如果对要做的实验结果没影响的话，是不需要去除的，biog在提取这块，效果还是很好的，纯度也高，操作按照说明书即可，简便快速。
赞一下 回复此楼
13楼2018-11-15 11:10:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小妞116(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-20 16:11:57
楼主的试剂有污染, 或者取样的时候样品交叉污染, 这是首要问题.
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-16 17:55:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sweetbobo

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小妞116(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-20 16:12:20
gyesang: 回帖置顶 2013-05-20 16:15:10
不知道你的RNA是不是做realtime PCR，一般情况是，为了防止基因组被扩增，第一要去除RNA中的DNA,就是你正常抽出RNA，加入DNaseI和RNA抑制剂，同时处理后，就再重新加入RNAiso再抽提一轮就可以；第二在设计引物的时候要跨内含子设计，该内含子长度一般要超过1Kb，不然也会有非特异性扩增。不知道你是不是这样的
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-16 20:14:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞天36

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小妞116: 金币+2, ★有帮助 2013-05-20 09:20:16
小妞116(gyesang代发): 金币+1, 75%酒精洗涤的目的是去盐，DNA是去除不了的 2013-05-20 16:13:08
你传染的细胞是否表达，你要的目的基因，没有的话，你的引物设计的特异性差。就是污染了吧
我们提取时直接用75%酒精洗涤，去除DNA
赞一下 回复此楼
生活很多不如意，现在想给变
4楼2013-05-20 08:43:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭