应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 耐盐碱菌全蛋白跑2D
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 1211  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Arsene_Lupin

铜虫 (小有名气)

[求助] 耐盐碱菌全蛋白跑2D

最近在学习双向电泳技术，帮老师跑蛋白。最近拿到一株耐盐碱菌株，提取总蛋白后跑2D（GE），3-10，18cm胶条，正常电聚焦后胶条不是应该从溴酚蓝色变成无色么，可是这几个样阳性端是无色，阴性端还是蓝色，且胶条厚度明显看出蓝色端厚于白色端，老师的几个样品完全变成无色。请教各位虫友可能的原因及解决之道。（此菌之前培养条件是10%Nacl，pH10）

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-05-16 13:44:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Arsene_Lupin

铜虫 (小有名气)
木有人回复呢！顶起来！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-16 23:29:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会是上样量太大，超过胶条的溶胀能力了？
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-17 08:59:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Arsene_Lupin

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-17 08:59:22
会不会是上样量太大，超过胶条的溶胀能力了？

每次都是350ul啊，其他都没问题的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-17 15:22:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by Arsene_Lupin at 2013-05-17 15:22:12
每次都是350ul啊，其他都没问题的
...

嗯。我一般上300μl。你的样品是否做了超速离心？有时候样品中的大颗粒也可能阻碍溶胀和电泳。
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-18 00:54:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Arsene_Lupin

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-18 00:54:31
嗯。我一般上300μl。你的样品是否做了超速离心？有时候样品中的大颗粒也可能阻碍溶胀和电泳。...

影响会很大么？因为用的是生工的细菌蛋白提取试剂盒，最后一步是3000r取上清，但是之前有用pbs洗，12000离心

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
6楼2013-05-18 07:17:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by Arsene_Lupin at 2013-05-18 07:17:08
影响会很大么？因为用的是生工的细菌蛋白提取试剂盒，最后一步是3000r取上清，但是之前有用pbs洗，12000离心
...

要看是什么样品了，如果是可溶蛋白的话，问题不是很大。有些样品疏水性蛋白多，不做超速离心会出问题。而且，样品经过超速离心会看到有少量沉淀的。
赞一下 回复此楼
7楼2013-05-19 03:12:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Arsene_Lupin

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-19 03:12:40
要看是什么样品了，如果是可溶蛋白的话，问题不是很大。有些样品疏水性蛋白多，不做超速离心会出问题。而且，样品经过超速离心会看到有少量沉淀的。...

这就是问题所在了，我提的是总蛋白，虽说耐盐菌会有些pI很高的蛋白但不至于一个点都没有吧，正常蛋白是不是也可以在胶条上分开？如果一些蛋白pI很高，超过胶条范围，不也应该跑到胶条的端点么？二向反映出来在端位会有大片纵带吧？这个样品浓度不高，不超过10，我按500ug／ml上样，考染后银染一点反映没有。因为需要达到500的浓度，所以350体系的话水化液的量会很少，我在想会不会水化不完全的关系？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
8楼2013-05-19 05:21:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by Arsene_Lupin at 2013-05-19 05:21:10
这就是问题所在了，我提的是总蛋白，虽说耐盐菌会有些pI很高的蛋白但不至于一个点都没有吧，正常蛋白是不是也可以在胶条上分开？如果一些蛋白pI很高，超过胶条范围，不也应该跑到胶条的端点么？二向反映出来在端位 ...

水化时样品的体积不宜超过水化液的1/10，否则会影响水化效果。如果样品太稀的话可以先沉淀蛋白样品后直接用水化液溶解样品。此外如果样品集中在pI较高的范围，你可以试试换一下胶条的pH范围。
赞一下 回复此楼
9楼2013-05-19 12:16:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Arsene_Lupin

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-19 12:16:27
水化时样品的体积不宜超过水化液的1/10，否则会影响水化效果。如果样品太稀的话可以先沉淀蛋白样品后直接用水化液溶解样品。此外如果样品集中在pI较高的范围，你可以试试换一下胶条的pH范围。...

恩恩，多谢指导，我再研究下。请问有没有这方面较详细的书或pdf可以推荐下？
赞一下 回复此楼
10楼2013-05-19 20:51:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Arsene_Lupin 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 329求调剂，一志愿西北工业大学，材料工程（085601） +8 小小机灵虫 2026-03-29 14/700 2026-04-03 19:38 by lijunpoly
[考研] 求调剂 +8 akdhjs 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by 戴维ING
[考研] 338求调剂 +7 晟功? 2026-04-03 7/350 2026-04-03 16:46 by wxiongid
[考研] 求调剂 +4 15064154688 2026-04-03 5/250 2026-04-03 15:07 by zrongyan
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-03 4/200 2026-04-03 13:28 by jiouuu
[考研] 372分材料与化工（085600）一志愿湖南大学求调剂 +5 蓝笺片 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:37 by dongzh2009
[考研] 。 +4 雾与海 2026-04-02 5/250 2026-04-02 19:16 by 土木硕士招生
[考研] 285求调剂 +14 AZMK 2026-04-02 14/700 2026-04-02 15:54 by 上九天揽月（好�
[考研] 一志愿346上海大学生物学 +3 上海大学346调剂 2026-04-01 3/150 2026-04-02 08:36 by w虫虫123
[考研] 11408 321分求调剂 +3 huchun12138 2026-03-30 4/200 2026-04-01 22:48 by guanxin1001
[考研] 0817化工学硕调剂 +11 努力上岸中！ 2026-03-31 11/550 2026-04-01 20:30 by 赖春艳
[考研] 290求调剂 +5 dfffsar 2026-03-29 5/250 2026-04-01 19:45 by 6781022
[考研] 322求调剂 +8 三水sss 2026-04-01 8/400 2026-04-01 10:19 by 唐沐儿
[考研] 288资源与环境专硕求调剂，不限专业，有学上就行 +25 lllllos 2026-03-30 26/1300 2026-04-01 09:52 by 一只好果子?
[考研] 考研材料工程351分调剂 +5 整个好的 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:36 by topgun2009
[考研] 070300化学354求调剂 +15 101次希望 2026-03-28 15/750 2026-03-31 17:58 by jp9609
[考研] 085601英二数二求调剂 总分325 +4 余航航 2026-03-31 4/200 2026-03-31 17:38 by 唐沐儿
[考研] 085601 329分调剂 +6 yzsa12 2026-03-31 6/300 2026-03-31 15:23 by yanflower7133
[考研] 291求调剂 +5 Y-cap 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:18 by mumin1990
[考研] 2026年华南师范大学欢迎化学，化工，生物，生医工等专业优秀学子加入！ +3 llss0711 2026-03-28 6/300 2026-03-29 10:26 by llss0711
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭