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Arsene_Lupin

铜虫 (小有名气)

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[求助] 耐盐碱菌全蛋白跑2D

最近在学习双向电泳技术，帮老师跑蛋白。最近拿到一株耐盐碱菌株，提取总蛋白后跑2D（GE），3-10，18cm胶条，正常电聚焦后胶条不是应该从溴酚蓝色变成无色么，可是这几个样阳性端是无色，阴性端还是蓝色，且胶条厚度明显看出蓝色端厚于白色端，老师的几个样品完全变成无色。请教各位虫友可能的原因及解决之道。（此菌之前培养条件是10%Nacl，pH10）

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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1楼 2013-05-16 13:44:33

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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

8楼: Originally posted by Arsene_Lupin at 2013-05-19 05:21:10
这就是问题所在了，我提的是总蛋白，虽说耐盐菌会有些pI很高的蛋白但不至于一个点都没有吧，正常蛋白是不是也可以在胶条上分开？如果一些蛋白pI很高，超过胶条范围，不也应该跑到胶条的端点么？二向反映出来在端位 ...

水化时样品的体积不宜超过水化液的1/10，否则会影响水化效果。如果样品太稀的话可以先沉淀蛋白样品后直接用水化液溶解样品。此外如果样品集中在pI较高的范围，你可以试试换一下胶条的pH范围。