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Arsene_Lupin

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[求助] 耐盐碱菌全蛋白跑2D

最近在学习双向电泳技术，帮老师跑蛋白。最近拿到一株耐盐碱菌株，提取总蛋白后跑2D（GE），3-10，18cm胶条，正常电聚焦后胶条不是应该从溴酚蓝色变成无色么，可是这几个样阳性端是无色，阴性端还是蓝色，且胶条厚度明显看出蓝色端厚于白色端，老师的几个样品完全变成无色。请教各位虫友可能的原因及解决之道。（此菌之前培养条件是10%Nacl，pH10）

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1楼 2013-05-16 13:44:33

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Arsene_Lupin

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引用回帖:

7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-19 03:12:40
要看是什么样品了，如果是可溶蛋白的话，问题不是很大。有些样品疏水性蛋白多，不做超速离心会出问题。而且，样品经过超速离心会看到有少量沉淀的。...

这就是问题所在了，我提的是总蛋白，虽说耐盐菌会有些pI很高的蛋白但不至于一个点都没有吧，正常蛋白是不是也可以在胶条上分开？如果一些蛋白pI很高，超过胶条范围，不也应该跑到胶条的端点么？二向反映出来在端位会有大片纵带吧？这个样品浓度不高，不超过10，我按500ug／ml上样，考染后银染一点反映没有。因为需要达到500的浓度，所以350体系的话水化液的量会很少，我在想会不会水化不完全的关系？

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