| 查看: 784 | 回复: 3 | ||
[求助]
关于蛋白免疫的抗体选择问题
|
|
一般来说，做Western blot只需要选择一抗和二抗就可以，比如说一抗是兔源的，二抗只需选择抗兔的就行了。 一样的道理，我想用抗体来做细胞免疫定位，就是利用抗体与蛋白结合，在电子显微镜下观察蛋白质的位置，二抗要选择金颗粒标记的才可以在点惊吓观察到。问题是：我的一抗是兔源的，而现有的金颗粒标记的二抗是 猴抗山羊， 不是抗兔的。那么我可不可以用碱性磷酸酶标记山羊抗兔的二抗先与一抗结合，然后用 金颗粒标记的猴抗山羊的二抗 与 碱性磷酸酶标记山羊抗兔的二抗 结合，从而间接地把一抗与金颗粒标记的二抗结合起来。 这个知识不太懂， 金颗粒标记的二抗比较贵，能省则省啊，请大侠们指点，谢谢啊！ |
回复此楼» 猜你喜欢
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
急！待毕业！使用ELISA检测血清中抗体滴度，包被时的抗原可以不与载体蛋白偶联吗？
已经有14人回复
- 做信号通路的，是不是要做定位才好！？
已经有5人回复
- 想弄明白抗体抗原的概念
已经有7人回复
- 胶体金诊断试纸T线不显色
已经有15人回复
- 如何选择与细菌抗体亲和性较好的抗原菌株
已经有5人回复
- 抗体和载体蛋白有结合吗？
已经有7人回复
- C3、C4、IgG、IgA、IgM是什么，有什么临床意义？
已经有13人回复
- 要做抗体，如何选择用哪段序列来表达蛋白？
已经有5人回复
- 请教一个免疫共沉淀技术的问题
已经有4人回复
- 关于多克隆抗体制备的有关问题
已经有4人回复
- 【分享】新手上路 Western blot问题集合
已经有6人回复
- 【求助/交流】请教蛋白质纯化实验遇到的麻烦！！！急急
已经有3人回复
- 【求助/交流】抗体求购
已经有3人回复
- 【求助/交流】请教一下，如果做通道蛋白的免疫荧光和WB选哪家的抗体最好
已经有5人回复
- 【求助/交流】含咪唑的蛋白免疫兔子
已经有11人回复
- 【求助/交流】求助免疫球蛋白纯化后有沉淀的事情！
已经有3人回复
- 【求助】免疫组织化学抗体
已经有5人回复
生物小通
木虫 (正式写手)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 1298.3
- 散金: 1069
- 红花: 5
- 帖子: 774
- 在线: 335.3小时
- 虫号: 1537514
- 注册: 2011-12-14
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤复发与转移
2楼2013-05-14 22:24:21
3楼2013-05-14 22:30:35
生物小通
木虫 (正式写手)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 1298.3
- 散金: 1069
- 红花: 5
- 帖子: 774
- 在线: 335.3小时
- 虫号: 1537514
- 注册: 2011-12-14
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤复发与转移
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
nixilu110: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢你的解答，有所了解了 2013-05-15 14:12:39
nixilu110: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢你的解答，有所了解了 2013-05-15 14:12:39
|
猴抗山羊抗体无法识别并结合山羊抗兔二抗。第一，二抗常常是拿这个动物抗体的Fc片段免疫另一种动物获得，所以你的碱性磷酸酶正好标记在这个部位就可能形成空间位阻效应而降低识别甚至不能识别。（当然也有抗专门其他部位的）第二，碱性磷酸酶分子量可能是80kDa,相对也比较大，形成空间位阻的可能性比较大。第三，碱性磷酸酶与抗体偶联时是偶联在-NH2（主要来自赖氨酸），是否Fc区标记的可能性更大（这个我不知道），当然这个标记一般是混合物，也就是说标记不同部位的混合，因为他们纯化一般是根据分子量大小进行纯化。 总之是碱性磷酸酶可能阻碍甚至消除了猴抗山羊抗体识别的山羊抗兔二抗的抗原决定簇，导致阴性结果。因此，建议你最好先仔细看说明书，另外可以找他们技术部的咨询，根据他们的建议或做或重新订购其他批号的抗体。 |
4楼2013-05-15 10:39:01
20