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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切时间
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liyeer

铜虫 (小有名气)

[交流] 酶切时间 已有5人参与

我用2个快切酶做双酶切，37度，半个小时后跑电泳，发现没有切完全。
问快切酶可不可以37度 过夜切？
快切酶的酶切时间多久反应会比较完全？
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1楼 2013-05-14 08:49:29
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stevenshi021

新虫 (小有名气)
★
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主要是你抽提DNA的时候，漂洗buffer的乙醇与蛋白杂质，就是你的DNA质量要达到1.0-2.0,。此外直接做酶切我一般使用加热的60°的dd水洗脱DNA。我的DNA一直10min就可以完全切开，没有说需要什么延长时间的，相信商业化的东西，不要太相信实验室的什么口口相传的protocol.希望对你有用
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9楼2013-05-17 10:23:58
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xy656691

金虫 (正式写手)
★ ★
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myprayer: 金币+1, 感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-14 11:00:01
一般的酶就两个小时吧。时间过长容易切散了。跑胶是会出现弥散。
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2楼2013-05-14 08:52:10
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aoda123

木虫 (正式写手)
★
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一般一个半小时到2小时
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身体健康，工作顺利
3楼2013-05-14 09:07:08
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stevenshi021

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果楼主使用ｆｅｒｍｅｎｔａｓ的ｆａｓｔ或者ＮＥＢ的上面有个小钟的酶一般半小时足够，你的东西没有切开你应该首先考虑是你样品的问题，而不是商业化的东西。
希望对你实验由帮助。
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4楼2013-05-14 10:16:52
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