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liyeer

铜虫 (小有名气)

[交流] 酶切时间 已有5人参与

我用2个快切酶做双酶切,37度,半个小时后跑电泳,发现没有切完全。
问快切酶可不可以37度 过夜切?
快切酶的酶切时间多久反应会比较完全?
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xy656691

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-14 11:00:01
一般的酶就两个小时吧。时间过长容易切散了。跑胶是会出现弥散。
2楼2013-05-14 08:52:10
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aoda123

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一般一个半小时到2小时
身体健康,工作顺利
3楼2013-05-14 09:07:08
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stevenshi021

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果楼主使用fermentas的fast或者NEB的上面有个小钟的酶一般半小时足够,你的东西没有切开你应该首先考虑是你样品的问题,而不是商业化的东西。
希望对你实验由帮助。
4楼2013-05-14 10:16:52
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liyeer

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xy656691 at 2013-05-14 08:52:10
一般的酶就两个小时吧。时间过长容易切散了。跑胶是会出现弥散。

时间长会切散了?为什么呢?请详细说明一下,好吗?
5楼2013-05-15 16:52:19
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liyeer

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-05-14 10:16:52
如果楼主使用fermentas的fast或者NEB的上面有个小钟的酶一般半小时足够,你的东西没有切开你应该首先考虑是你样品的问题,而不是商业化的东西。
希望对你实验由帮助。

样品的什么问题会导致切得不完全呢?请您详细说明一下好吗?以便我以后改进实验
谢谢
6楼2013-05-15 16:53:25
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20083630zhan

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也是用的fementase的快切酶,EcoR1上面说PCR产物需要20min,质粒只需要5min.我做的时候有时候能切开,有时候切不开,建议楼主适当延长酶切时间(一般延长10-15min)
7楼2013-05-15 21:50:11
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sunnyboylg

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一般的要2-3小时才能切完全,质粒酶切时间更短
要么读书,要么旅行,身体和灵魂,必须有一个在路上
8楼2013-05-15 22:30:58
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stevenshi021

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
主要是你抽提DNA的时候,漂洗buffer的乙醇与蛋白杂质,就是你的DNA质量要达到1.0-2.0,。此外直接做酶切我一般使用加热的60°的dd水洗脱DNA。我的DNA一直10min就可以完全切开,没有说需要什么延长时间的,相信商业化的东西,不要太相信实验室的什么口口相传的protocol.希望对你有用
9楼2013-05-17 10:23:58
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