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liyeer

铜虫 (小有名气)

[交流] 酶切时间 已有5人参与

我用2个快切酶做双酶切，37度，半个小时后跑电泳，发现没有切完全。
问快切酶可不可以37度 过夜切？
快切酶的酶切时间多久反应会比较完全？
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1楼 2013-05-14 08:49:29
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xy656691

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-14 11:00:01
一般的酶就两个小时吧。时间过长容易切散了。跑胶是会出现弥散。
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2楼2013-05-14 08:52:10
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aoda123

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一般一个半小时到2小时
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身体健康，工作顺利
3楼2013-05-14 09:07:08
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stevenshi021

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果楼主使用ｆｅｒｍｅｎｔａｓ的ｆａｓｔ或者ＮＥＢ的上面有个小钟的酶一般半小时足够，你的东西没有切开你应该首先考虑是你样品的问题，而不是商业化的东西。
希望对你实验由帮助。
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4楼2013-05-14 10:16:52
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liyeer

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xy656691 at 2013-05-14 08:52:10
一般的酶就两个小时吧。时间过长容易切散了。跑胶是会出现弥散。

时间长会切散了？为什么呢？请详细说明一下，好吗？
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5楼2013-05-15 16:52:19
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liyeer

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-05-14 10:16:52
如果楼主使用ｆｅｒｍｅｎｔａｓ的ｆａｓｔ或者ＮＥＢ的上面有个小钟的酶一般半小时足够，你的东西没有切开你应该首先考虑是你样品的问题，而不是商业化的东西。
希望对你实验由帮助。

样品的什么问题会导致切得不完全呢？请您详细说明一下好吗？以便我以后改进实验
谢谢
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6楼2013-05-15 16:53:25
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20083630zhan

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也是用的fementase的快切酶，EcoR1上面说PCR产物需要20min,质粒只需要5min.我做的时候有时候能切开，有时候切不开，建议楼主适当延长酶切时间（一般延长10-15min）
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7楼2013-05-15 21:50:11
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sunnyboylg

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一般的要2-3小时才能切完全，质粒酶切时间更短
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要么读书，要么旅行，身体和灵魂，必须有一个在路上
8楼2013-05-15 22:30:58
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stevenshi021

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
主要是你抽提DNA的时候，漂洗buffer的乙醇与蛋白杂质，就是你的DNA质量要达到1.0-2.0,。此外直接做酶切我一般使用加热的60°的dd水洗脱DNA。我的DNA一直10min就可以完全切开，没有说需要什么延长时间的，相信商业化的东西，不要太相信实验室的什么口口相传的protocol.希望对你有用
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9楼2013-05-17 10:23:58
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