5楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-05-11 22:43:45
液体浑浊就是其中的溶质的溶解度低，提高溶质的溶解度即可。让溶液pH离开蛋白质的pI，但是太酸或太碱，以免蛋白质变性，引起更多浑浊；另外，可能是其他的非目的的杂质太多了，离心、分级沉淀、层析分离出目的蛋白质 ...

4楼: Originally posted by 草蔻年华 at 2013-05-11 20:44:17
你的蛋白的等电点是多少，是不是蛋白析出了，可以调节透析液 的PH试试。

8楼: Originally posted by yxncas-2012 at 2013-05-12 19:43:14
1、你这个pH变化比较大，有些蛋白的pI值在你透析液附近，产生沉淀；
2、你的盐浓度下降的也太快，没有一个梯度；
3、破菌后的上清杂质太多，可以选择进行硫酸铵分布沉淀的方式初步除杂，然后再用你想用的buffer进 ...

10楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2013-05-13 09:16:58
试过用不含NaCl的破碎缓冲液，透析中还是会出现浑浊，跟NaCl的浓度有关系吗？加NaCl是为了增加蛋白的溶解度的吧，我想确认一下这个问题...

14楼: Originally posted by 不转录的DNA at 2013-05-13 09:47:46
是的，许多蛋白在有盐和没盐的情况下的溶解性是不一样的！

适当的增加NaCL的含量可以提到蛋白的溶解性和蛋白复性的产率！
我想可能你的蛋白是盐溶性蛋白吧！...

15楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2013-05-13 09:55:03
我用不含NaCl的破碎缓冲液与含NaCl的破碎缓冲液分别破碎菌体以后跑电泳做了对照，我的目的蛋白的含量没有太大的区别，但是用不含NaCl的的破碎缓冲液破碎以后再透析的时候还是会出现浑浊，这个沉淀中的蛋白应该是没 ...

16楼: Originally posted by 不转录的DNA at 2013-05-13 10:28:40
你的沉淀，我也不知道还有木有活性！你怎么溶出来呢？一般的溶解方法可能溶解不出来了，你可能需要用Urea或盐酸胍溶解了！那就变性了！变性了，你还得复性！不建议你用沉淀！
因为你的蛋白是上清蛋白，你的蛋白有 ...

17楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2013-05-13 10:40:45
我的蛋白没有标签，破碎上清可以直接上离子柱吗？不需要除盐吗？我用软件预测的蛋白等电点是8.56，但是不知道它的的具体构象所以实际的等电点并不能确定...

18楼: Originally posted by 不转录的DNA at 2013-05-13 11:04:21
哦  ！你的不除盐是不可以过离子柱的！！建议你：
先用硫酸铵分级沉淀初步纯化你的蛋白，是你的蛋白纯度更高点！！
再用脱盐柱G25脱盐试试！G25脱盐快速又方便！脱盐既是换buffer！
可以先取少量的脱盐试一试！ ...