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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T-RFLP分析土壤多样性提取DNA图谱
汕头大学海洋科学接受调剂
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xieweijing

金虫 (正式写手)

[求助] T-RFLP分析土壤多样性提取DNA图谱

用OMEGA试剂盒对土壤进行提取DNA,后进行跑胶，再进行PCR检测，用的通用引物27f，1492r，各2ul,模板5ul,supermix25ul,ddh2o16ul,95。5min，95。30s，50。45s，72。1min，35个循环，72.10min。不知道扩增出了没，不太懂，希望大家多指导下，O(∩_∩)O谢谢

提取DNA后分装后合并起来后又跑的胶



PCR后的效果
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好好加油，为自己，也为自己以后！
1楼 2013-05-10 14:50:03
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liangzi423

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我就是用OMEGA土壤试剂盒做的，一直在用效果不错的，用基因组P16s是很好做的 我用的退火温度是55  延伸1分钟，引物用的 FAM-341f  /907r pcr出来胶回收，酶切一下  直接去测序仪出结果了 挺简单的。omega 提的基因组直接就可以用的，因为提取步骤里面有除腐殖酸的步骤，很方便！如果效果不好 建议提取过程中有一步加异丙醇以后静置的 你放在-20时间长点或者过夜放一下。剩下就是数据处理 这个麻烦点，个人就得比DGGE 操作要简单！祝实验顺利 希望对你有帮助！
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20楼2013-05-22 17:18:30
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蓝天飞翔

木虫 (知名作家)

奋斗，小青年

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xieweijing(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-05-11 09:39:00
看不见扩出来没有，没扩出来吧
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忙碌是一种幸福，让我们没时间体会痛苦；奔波是一种快乐，让我们真实地感受生活；疲惫是一种享受，让我们无暇空虚。
2楼2013-05-10 22:43:18
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xieweijing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 蓝天飞翔 at 2013-05-10 22:43:18
看不见扩出来没有，没扩出来吧

我也感觉没扩出来，不知道原因
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好好加油，为自己，也为自己以后！
3楼2013-05-11 08:44:42
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

没扩出来。你可以试试把72℃延伸时间可以增加到90s，我记得这个引物扩增出来的长度是1.5K，1min时间有点悬啊。我当时选引物的时候，就是因为这个长度直接放弃了。
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4楼2013-05-14 13:23:39
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