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xieweijing

金虫 (正式写手)

[求助] T-RFLP分析土壤多样性提取DNA图谱

用OMEGA试剂盒对土壤进行提取DNA,后进行跑胶,再进行PCR检测,用的通用引物27f,1492r,各2ul,模板5ul,supermix25ul,ddh2o16ul,95。5min,95。30s,50。45s,72。1min,35个循环,72.10min。不知道扩增出了没,不太懂,希望大家多指导下,O(∩_∩)O谢谢

提取DNA后分装后合并起来后又跑的胶



PCR后的效果
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好好加油,为自己,也为自己以后!
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

没扩出来。你可以试试把72℃延伸时间可以增加到90s,我记得这个引物扩增出来的长度是1.5K,1min时间有点悬啊。我当时选引物的时候,就是因为这个长度直接放弃了。
4楼2013-05-14 13:23:39
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by xieweijing at 2013-05-14 19:07:54
那你也是做T-RFLP吗?那引物用的什么...

我不做这个,导师说太麻烦了,你可以357f和518r,533f&907r,954f&1369r,这三对都不超过500bp的
8楼2013-05-15 15:05:23
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by xieweijing at 2013-05-15 22:17:25
羡慕...

不要羡慕我,PCR之前做的好好的,最近做不出来了。
11楼2013-05-17 00:01:41
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by xieweijing at 2013-05-17 18:34:59
没办法这个也有运气的成分啊...

我觉得PCR已经没有运气的原因了,就是影响因素太多了,同时许多东西都商业化,造成这种麻烦的情况。
13楼2013-05-18 13:29:40
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by xieweijing at 2013-05-19 11:37:38
我当时选引物的时候,就是因为这个长度直接放弃了?那你选的什么引物...

533f&907r,F~968&R1401,954f&1369r这些都可以啊
17楼2013-05-19 14:05:19
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by xieweijing at 2013-05-18 19:17:24
那能怎么办呢...

多试,多花钱,多花时间,多攒人品......还能怎么办啊
18楼2013-05-19 14:06:43
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