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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T-RFLP分析土壤多样性提取DNA图谱
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xieweijing

金虫 (正式写手)

[求助] T-RFLP分析土壤多样性提取DNA图谱

用OMEGA试剂盒对土壤进行提取DNA,后进行跑胶，再进行PCR检测，用的通用引物27f，1492r，各2ul,模板5ul,supermix25ul,ddh2o16ul,95。5min，95。30s，50。45s，72。1min，35个循环，72.10min。不知道扩增出了没，不太懂，希望大家多指导下，O(∩_∩)O谢谢

提取DNA后分装后合并起来后又跑的胶



PCR后的效果
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好好加油，为自己，也为自己以后！
1楼 2013-05-10 14:50:03
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蓝天飞翔

木虫 (知名作家)

奋斗，小青年

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xieweijing(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-05-11 09:39:00
看不见扩出来没有，没扩出来吧
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忙碌是一种幸福，让我们没时间体会痛苦；奔波是一种快乐，让我们真实地感受生活；疲惫是一种享受，让我们无暇空虚。
2楼2013-05-10 22:43:18
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xieweijing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 蓝天飞翔 at 2013-05-10 22:43:18
看不见扩出来没有，没扩出来吧

我也感觉没扩出来，不知道原因
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好好加油，为自己，也为自己以后！
3楼2013-05-11 08:44:42
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

没扩出来。你可以试试把72℃延伸时间可以增加到90s，我记得这个引物扩增出来的长度是1.5K，1min时间有点悬啊。我当时选引物的时候，就是因为这个长度直接放弃了。
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4楼2013-05-14 13:23:39
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j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

没扩出来，延伸时间短了，增加到1分半钟试试吧
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
5楼2013-05-14 13:51:48
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xieweijing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by j2 at 2013-05-14 13:51:48
没扩出来，延伸时间短了，增加到1分半钟试试吧

6楼2013-05-14 19:07:22
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xieweijing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by DoRbIr at 2013-05-14 13:23:39
没扩出来。你可以试试把72℃延伸时间可以增加到90s，我记得这个引物扩增出来的长度是1.5K，1min时间有点悬啊。我当时选引物的时候，就是因为这个长度直接放弃了。

那你也是做T-RFLP吗？那引物用的什么
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好好加油，为自己，也为自己以后！
7楼2013-05-14 19:07:54
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DoRbIr

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xieweijing at 2013-05-14 19:07:54
那你也是做T-RFLP吗？那引物用的什么...

我不做这个，导师说太麻烦了，你可以357f和518r,533f&907r,954f&1369r，这三对都不超过500bp的
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8楼2013-05-15 15:05:23
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xieweijing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by DoRbIr at 2013-05-15 15:05:23
我不做这个，导师说太麻烦了，你可以357f和518r,533f&907r,954f&1369r，这三对都不超过500bp的...

羡慕
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好好加油，为自己，也为自己以后！
9楼2013-05-15 22:17:25
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

27f，1492r
扩增延伸45s是没有问题的。
我一直都在这么做。
退火我用过53度和55度，都扩增的挺好的。
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10楼2013-05-16 09:41:05
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