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DoRbIr

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by xieweijing at 2013-05-15 22:17:25
羡慕...

不要羡慕我,PCR之前做的好好的,最近做不出来了。
11楼2013-05-17 00:01:41
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xieweijing

金虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by DoRbIr at 2013-05-17 00:01:41
不要羡慕我,PCR之前做的好好的,最近做不出来了。...

没办法这个也有运气的成分啊
好好加油,为自己,也为自己以后!
12楼2013-05-17 18:34:59
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

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12楼: Originally posted by xieweijing at 2013-05-17 18:34:59
没办法这个也有运气的成分啊...

我觉得PCR已经没有运气的原因了,就是影响因素太多了,同时许多东西都商业化,造成这种麻烦的情况。
13楼2013-05-18 13:29:40
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xieweijing

金虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by DoRbIr at 2013-05-18 13:29:40
我觉得PCR已经没有运气的原因了,就是影响因素太多了,同时许多东西都商业化,造成这种麻烦的情况。...

那能怎么办呢
好好加油,为自己,也为自己以后!
14楼2013-05-18 19:17:24
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xieweijing

金虫 (正式写手)

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4楼: Originally posted by DoRbIr at 2013-05-14 13:23:39
没扩出来。你可以试试把72℃延伸时间可以增加到90s,我记得这个引物扩增出来的长度是1.5K,1min时间有点悬啊。我当时选引物的时候,就是因为这个长度直接放弃了。

我当时选引物的时候,就是因为这个长度直接放弃了?那你选的什么引物
好好加油,为自己,也为自己以后!
15楼2013-05-19 11:37:38
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672234993

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感觉是没扩出来,我建议你纯化一下基因组DNA,有时候土壤里面腐植酸等PCR抑制剂太多,会影响扩增的;或者你先试一下将模板稀释10倍,100倍的样子P一下,看看能不能P出来。
延伸时间也是建议90s。
我会回火星去的,别催我。。。。。。
16楼2013-05-19 13:01:46
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by xieweijing at 2013-05-19 11:37:38
我当时选引物的时候,就是因为这个长度直接放弃了?那你选的什么引物...

533f&907r,F~968&R1401,954f&1369r这些都可以啊
17楼2013-05-19 14:05:19
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by xieweijing at 2013-05-18 19:17:24
那能怎么办呢...

多试,多花钱,多花时间,多攒人品......还能怎么办啊
18楼2013-05-19 14:06:43
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xieweijing

金虫 (正式写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 672234993 at 2013-05-19 13:01:46
感觉是没扩出来,我建议你纯化一下基因组DNA,有时候土壤里面腐植酸等PCR抑制剂太多,会影响扩增的;或者你先试一下将模板稀释10倍,100倍的样子P一下,看看能不能P出来。
延伸时间也是建议90s。

稀释过的还是P不出来
好好加油,为自己,也为自己以后!
19楼2013-05-19 20:27:40
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liangzi423

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我就是用OMEGA土壤试剂盒做的,一直在用效果不错的,用基因组P16s是很好做的 我用的退火温度是55  延伸1分钟,引物用的 FAM-341f  /907r pcr出来胶回收,酶切一下  直接去测序仪出结果了 挺简单的。omega 提的基因组直接就可以用的,因为提取步骤里面有除腐殖酸的步骤,很方便!如果效果不好 建议提取过程中有一步加异丙醇以后静置的 你放在-20时间长点或者过夜放一下。剩下就是数据处理 这个麻烦点,个人就得比DGGE 操作要简单!祝实验顺利 希望对你有帮助!
20楼2013-05-22 17:18:30
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