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DoRbIr

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by xieweijing at 2013-05-15 22:17:25
羡慕...

不要羡慕我，PCR之前做的好好的，最近做不出来了。
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11楼2013-05-17 00:01:41
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xieweijing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by DoRbIr at 2013-05-17 00:01:41
不要羡慕我，PCR之前做的好好的，最近做不出来了。...

没办法这个也有运气的成分啊
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好好加油，为自己，也为自己以后！
12楼2013-05-17 18:34:59
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DoRbIr

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by xieweijing at 2013-05-17 18:34:59
没办法这个也有运气的成分啊...

我觉得PCR已经没有运气的原因了，就是影响因素太多了，同时许多东西都商业化，造成这种麻烦的情况。
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13楼2013-05-18 13:29:40
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xieweijing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by DoRbIr at 2013-05-18 13:29:40
我觉得PCR已经没有运气的原因了，就是影响因素太多了，同时许多东西都商业化，造成这种麻烦的情况。...

那能怎么办呢
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好好加油，为自己，也为自己以后！
14楼2013-05-18 19:17:24
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xieweijing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by DoRbIr at 2013-05-14 13:23:39
没扩出来。你可以试试把72℃延伸时间可以增加到90s，我记得这个引物扩增出来的长度是1.5K，1min时间有点悬啊。我当时选引物的时候，就是因为这个长度直接放弃了。

我当时选引物的时候，就是因为这个长度直接放弃了?那你选的什么引物
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好好加油，为自己，也为自己以后！
15楼2013-05-19 11:37:38
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672234993

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感觉是没扩出来，我建议你纯化一下基因组DNA，有时候土壤里面腐植酸等PCR抑制剂太多，会影响扩增的；或者你先试一下将模板稀释10倍，100倍的样子P一下，看看能不能P出来。
延伸时间也是建议90s。
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我会回火星去的，别催我。。。。。。
16楼2013-05-19 13:01:46
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DoRbIr

金虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by xieweijing at 2013-05-19 11:37:38
我当时选引物的时候，就是因为这个长度直接放弃了?那你选的什么引物...

533f&907r,F~968&R1401,954f&1369r这些都可以啊
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17楼2013-05-19 14:05:19
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DoRbIr

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by xieweijing at 2013-05-18 19:17:24
那能怎么办呢...

多试，多花钱，多花时间，多攒人品......还能怎么办啊
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18楼2013-05-19 14:06:43
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xieweijing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 672234993 at 2013-05-19 13:01:46
感觉是没扩出来，我建议你纯化一下基因组DNA，有时候土壤里面腐植酸等PCR抑制剂太多，会影响扩增的；或者你先试一下将模板稀释10倍，100倍的样子P一下，看看能不能P出来。
延伸时间也是建议90s。

稀释过的还是P不出来
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好好加油，为自己，也为自己以后！
19楼2013-05-19 20:27:40
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liangzi423

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我就是用OMEGA土壤试剂盒做的，一直在用效果不错的，用基因组P16s是很好做的 我用的退火温度是55  延伸1分钟，引物用的 FAM-341f  /907r pcr出来胶回收，酶切一下  直接去测序仪出结果了 挺简单的。omega 提的基因组直接就可以用的，因为提取步骤里面有除腐殖酸的步骤，很方便！如果效果不好 建议提取过程中有一步加异丙醇以后静置的 你放在-20时间长点或者过夜放一下。剩下就是数据处理 这个麻烦点，个人就得比DGGE 操作要简单！祝实验顺利 希望对你有帮助！
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20楼2013-05-22 17:18:30
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