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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T-RFLP分析土壤多样性提取DNA图谱
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xieweijing

金虫 (正式写手)

[求助] T-RFLP分析土壤多样性提取DNA图谱

用OMEGA试剂盒对土壤进行提取DNA,后进行跑胶，再进行PCR检测，用的通用引物27f，1492r，各2ul,模板5ul,supermix25ul,ddh2o16ul,95。5min，95。30s，50。45s，72。1min，35个循环，72.10min。不知道扩增出了没，不太懂，希望大家多指导下，O(∩_∩)O谢谢

提取DNA后分装后合并起来后又跑的胶



PCR后的效果
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好好加油，为自己，也为自己以后！
1楼 2013-05-10 14:50:03
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xieweijing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 672234993 at 2013-05-19 13:01:46
感觉是没扩出来，我建议你纯化一下基因组DNA，有时候土壤里面腐植酸等PCR抑制剂太多，会影响扩增的；或者你先试一下将模板稀释10倍，100倍的样子P一下，看看能不能P出来。
延伸时间也是建议90s。

稀释过的还是P不出来
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好好加油，为自己，也为自己以后！
19楼2013-05-19 20:27:40
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蓝天飞翔

木虫 (知名作家)

奋斗，小青年

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xieweijing(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-05-11 09:39:00
看不见扩出来没有，没扩出来吧
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忙碌是一种幸福，让我们没时间体会痛苦；奔波是一种快乐，让我们真实地感受生活；疲惫是一种享受，让我们无暇空虚。
2楼2013-05-10 22:43:18
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xieweijing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 蓝天飞翔 at 2013-05-10 22:43:18
看不见扩出来没有，没扩出来吧

我也感觉没扩出来，不知道原因
赞一下 回复此楼
好好加油，为自己，也为自己以后！
3楼2013-05-11 08:44:42
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

没扩出来。你可以试试把72℃延伸时间可以增加到90s，我记得这个引物扩增出来的长度是1.5K，1min时间有点悬啊。我当时选引物的时候，就是因为这个长度直接放弃了。
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4楼2013-05-14 13:23:39
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