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xieweijing

金虫 (正式写手)

[求助] T-RFLP分析土壤多样性提取DNA图谱

用OMEGA试剂盒对土壤进行提取DNA,后进行跑胶,再进行PCR检测,用的通用引物27f,1492r,各2ul,模板5ul,supermix25ul,ddh2o16ul,95。5min,95。30s,50。45s,72。1min,35个循环,72.10min。不知道扩增出了没,不太懂,希望大家多指导下,O(∩_∩)O谢谢

提取DNA后分装后合并起来后又跑的胶



PCR后的效果
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好好加油,为自己,也为自己以后!
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xieweijing

金虫 (正式写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 672234993 at 2013-05-19 13:01:46
感觉是没扩出来,我建议你纯化一下基因组DNA,有时候土壤里面腐植酸等PCR抑制剂太多,会影响扩增的;或者你先试一下将模板稀释10倍,100倍的样子P一下,看看能不能P出来。
延伸时间也是建议90s。

稀释过的还是P不出来
好好加油,为自己,也为自己以后!
19楼2013-05-19 20:27:40
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蓝天飞翔

木虫 (知名作家)

奋斗,小青年

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xieweijing(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-05-11 09:39:00
看不见扩出来没有,没扩出来吧
忙碌是一种幸福,让我们没时间体会痛苦;奔波是一种快乐,让我们真实地感受生活;疲惫是一种享受,让我们无暇空虚。
2楼2013-05-10 22:43:18
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xieweijing

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 蓝天飞翔 at 2013-05-10 22:43:18
看不见扩出来没有,没扩出来吧

我也感觉没扩出来,不知道原因
好好加油,为自己,也为自己以后!
3楼2013-05-11 08:44:42
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

没扩出来。你可以试试把72℃延伸时间可以增加到90s,我记得这个引物扩增出来的长度是1.5K,1min时间有点悬啊。我当时选引物的时候,就是因为这个长度直接放弃了。
4楼2013-05-14 13:23:39
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