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zhea1057d

新虫 (初入文坛)

[交流] TALENs打靶后检测问题 已有2人参与

尝试做TALENs打靶后是否引起突变的实验,打靶spacer中有PstI识别位点,若引起突变,很可能该位点不再被识别。设计了巢式PCR,并做了两种不同策略做阴性对照样本(wide type基因组),第一种:酶切基因组DNA,再做两轮PCR;第二种:未酶切基因组DNA,做第一轮PCR后酶切,再做nested PCR。结果是两种方案阴性样本都出现很亮的条带,大小与未酶切的PCR产物片段一致。请教是哪里出了问题,还是这个方案不可行?非常感谢!
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

★ ★
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-11 21:32:37
可以只做一轮PCR然后直接切产物再跑胶, 如果你做巢式第一轮产物没有切干净第二轮下来也会有很多PCR产物的.
另外, 楼主之前有没有TALEN经验? 现在的系统效率是多少? 如果是1%那可能是取样数量还没有够.
2楼2013-05-11 00:22:02
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Renavatio

木虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
直接PCR之后酶切即可!
Undefined!
3楼2013-05-11 21:17:24
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