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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » TALENs打靶后检测问题
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zhea1057d

新虫 (初入文坛)

[交流] TALENs打靶后检测问题 已有2人参与

尝试做TALENs打靶后是否引起突变的实验，打靶spacer中有PstI识别位点，若引起突变，很可能该位点不再被识别。设计了巢式PCR，并做了两种不同策略做阴性对照样本（wide type基因组），第一种:酶切基因组DNA，再做两轮PCR；第二种：未酶切基因组DNA，做第一轮PCR后酶切，再做nested PCR。结果是两种方案阴性样本都出现很亮的条带，大小与未酶切的PCR产物片段一致。请教是哪里出了问题，还是这个方案不可行？非常感谢！
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1楼 2013-05-09 07:02:58
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Renavatio

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
直接PCR之后酶切即可！
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Undefined！
3楼2013-05-11 21:17:24
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bullfrog325

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-11 21:32:37
可以只做一轮PCR然后直接切产物再跑胶, 如果你做巢式第一轮产物没有切干净第二轮下来也会有很多PCR产物的.
另外, 楼主之前有没有TALEN经验? 现在的系统效率是多少? 如果是1%那可能是取样数量还没有够.
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2楼2013-05-11 00:22:02
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