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hello青果

银虫 (小有名气)

[求助] 跪求:蛋白质电泳条带老是跑不开去怎么办

本科毕业论文跑蛋白质电泳,跑了几次蛋白质条带都聚在前面,溶液又重新配的也还是不行,别同学用我们的溶液条带都跑开了,但我们还是不行,胶浓度应该没问题,我们用的12%的分离胶,5%的浓缩胶,这个胶浓度下别同学的marker都是分散的,我们的就不行,我们用了12mA和20mA的电流,长的时候跑了近三个小时溴酚蓝都跑过了还不行,难道我们的操作有问题,但实在不知道错在哪里有经验的师哥师姐指一条明路,小妹先在这谢谢了

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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
hello青果: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-05-11 18:31:46
数了半天才找到是9楼,说的对!是你的电泳液的问题,你所谓的电泳时间不是你的有效电泳时间!建议使用新的电泳液,在电泳初始阶段看看气泡是不是均匀的从底部升起而不是那种像烟花似的一丝丝的上来。一般国内实验室省点钱都让学生反复使用电泳液。此外你在电泳过程中要看看电源有没有报错,一般我使用伯乐的mini系统,2块胶200v,40-45min 12%的胶(29:1),一块胶建议使用横流35mA,35min 同上12%的胶。我的建议是每次电泳时候内槽一定用新配的。关于你的胶的试剂什么的我认为都没有问题,一个实验室一般这些东西都是共享的!多像实验室的研究生问问。刚开始实验都是这样的!
希望对你有用。
12楼2013-05-10 10:51:26
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
hello青果(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-09 08:17:00
楼主你在用溴酚蓝染胶的时候一定有碰到胶吧, 对于12%的胶来说, 韧性是很好的, 你捏住一个角可以把它提起来的(甚至还可以轻轻地左右晃动). 如果楼主发现它软得不行好像轻轻一捏就烂掉的话问题就是在胶上面. 楼主的跑胶缓冲液看上去没问题, 建议换一瓶acrylamide.
2楼2013-05-08 23:53:01
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mitocam

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-09 08:17:12
如LS所说,检查一下acrylamide浓度和缓冲液pH。跑胶时有没有漏电?
3楼2013-05-09 01:30:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
hello青果(myprayer代发): 金币+1, 鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-09 08:17:42
我觉得是acrylamide浓度或者是acrylamide与bisacrylamide的比例有问题。
4楼2013-05-09 02:19:40
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