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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 跪求：蛋白质电泳条带老是跑不开去怎么办
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hello青果

银虫 (小有名气)

[求助] 跪求：蛋白质电泳条带老是跑不开去怎么办

本科毕业论文跑蛋白质电泳，跑了几次蛋白质条带都聚在前面，溶液又重新配的也还是不行，别同学用我们的溶液条带都跑开了，但我们还是不行，胶浓度应该没问题，我们用的12%的分离胶，5%的浓缩胶，这个胶浓度下别同学的marker都是分散的，我们的就不行，我们用了12mA和20mA的电流，长的时候跑了近三个小时溴酚蓝都跑过了还不行，难道我们的操作有问题，但实在不知道错在哪里有经验的师哥师姐指一条明路，小妹先在这谢谢了

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1楼 2013-05-08 22:56:32
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hello青果(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-09 08:17:00
楼主你在用溴酚蓝染胶的时候一定有碰到胶吧, 对于12%的胶来说, 韧性是很好的, 你捏住一个角可以把它提起来的(甚至还可以轻轻地左右晃动). 如果楼主发现它软得不行好像轻轻一捏就烂掉的话问题就是在胶上面. 楼主的跑胶缓冲液看上去没问题, 建议换一瓶acrylamide.
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2楼2013-05-08 23:53:01
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mitocam

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-09 08:17:12
如LS所说，检查一下acrylamide浓度和缓冲液pH。跑胶时有没有漏电？
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3楼2013-05-09 01:30:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hello青果(myprayer代发): 金币+1, 鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-09 08:17:42
我觉得是acrylamide浓度或者是acrylamide与bisacrylamide的比例有问题。
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4楼2013-05-09 02:19:40
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hello青果

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-05-08 23:53:01
楼主你在用溴酚蓝染胶的时候一定有碰到胶吧, 对于12%的胶来说, 韧性是很好的, 你捏住一个角可以把它提起来的(甚至还可以轻轻地左右晃动). 如果楼主发现它软得不行好像轻轻一捏就烂掉的话问题就是在胶上面. 楼主的跑 ...

我们的丙烯酰胺是重新配的，别的同学也用过了，他们能跑开啊
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5楼2013-05-09 09:06:16
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hello青果

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mitocam at 2013-05-09 01:30:54
如LS所说，检查一下acrylamide浓度和缓冲液pH。跑胶时有没有漏电？

跑胶时漏电怎么检查，我们也用过另一台电泳槽，效果也不好
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6楼2013-05-09 09:08:52
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franklinhg

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hello青果(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 13:05:53
可以很负责的告诉你，你的Tris液体的pH值有问题！！！
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7楼2013-05-09 09:27:04
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DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hello青果(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 13:05:04
1949stone: MolEPI+1, good 2013-05-10 16:10:56
hello青果: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-05-11 18:27:07
首先检查一下所用试剂是否配置正确，如丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的比例，一般都是29:1的40%储液体；分离胶Tris-HCl的pH值是否是8.8，一般浓度为1.5M；AP、SDS、TEMED是否新鲜。
然后是仪器是否能提供稳定的电流/电压，参数方面是否设置有错误，例如你要12mA，其他两个值电压和功率是不是调成了固定值，我用的时候是用哪个值哪个值就固定，其他两个值调到最大。

建议你看下你同学的实验方法，和自己的比较一下看有什么不同，然后看看是不是自己的问题。
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8楼2013-05-09 11:08:13
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710002191

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hello青果(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 13:05:12
我觉得是电压电流的事，我们师兄跑不开的时候跑了足足6个小时才跑好的，不要着急，慢点来
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may
9楼2013-05-09 11:10:43
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hello青果(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 13:05:25
hello青果: 金币+1, ★有帮助, 我们好像确实是制胶的问题，移液枪没校正可能产生了影响，我们用了10%的胶跑了，效果好了一点 2013-05-11 18:31:15
我跑过这样的，楼主制胶的时候注意点，我那次是因为胶不好，分离不好，至于哪里不好，我到现在也不明白。再配置一次，让你同学在旁边看着你。
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10楼2013-05-09 11:34:13
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