应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 扩增50kB的片段时，设计引物需要注意哪些？
41/1返回列表
查看: 882  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

annsp

金虫 (正式写手)

[求助] 扩增50kB的片段时，设计引物需要注意哪些？

我想扩增50Kb的片段，存在的问题如下：
1、用什么酶，Takara的LA Taq是否可以？
2、设计引物的时候跟平时设计2-3kb的相比，是否有其他需要注意的地方？
3、因为是直接从真核生物的DNA上克隆的，有内含子，所以想用真核的表达体系，有没有合适的表达载体和宿主可以推荐？
请各位大侠指点！不胜感激！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-07 11:31:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
annsp(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-07 16:51:33
5okb???楼主怎么要扩这么长的片段啊，好像LA是办不到的，LA的说明书上写的是以λ DNA为模板是有效长度是35kb,人基因组为模板是17.5kb.其他的我也没做过，就不瞎说了~
赞一下 回复此楼
一花一世界、一叶一菩提
2楼2013-05-07 12:02:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
annsp(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-07 16:51:42
50kb？你能扩出来才怪呢；
参考下文献是用cDNA还是全DNA，cDNA应该要短很多；如果内含子比较重要，那就没办法了
用真核还是原核与蛋白本身有关，比如有糖链之类的，必须要用真核，否则蛋白可能没活性
；
赞一下 回复此楼
第三军团
3楼2013-05-07 15:05:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaolf

木虫 (著名写手)

胖虎爱唱歌

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很明显楼主在做一件很有挑战性的事，希望成功之后来分享下经验啊。
赞一下 回复此楼
我是胖虎，我是孩子王！
4楼2013-05-07 15:27:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 annsp 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭