24小时热门版块排行榜    

查看: 704  |  回复: 3

annsp

金虫 (正式写手)

[求助] 扩增50kB的片段时,设计引物需要注意哪些?

我想扩增50Kb的片段,存在的问题如下:
1、用什么酶,Takara的LA Taq是否可以?
2、设计引物的时候跟平时设计2-3kb的相比,是否有其他需要注意的地方?
3、因为是直接从真核生物的DNA上克隆的,有内含子,所以想用真核的表达体系,有没有合适的表达载体和宿主可以推荐?
请各位大侠指点!不胜感激!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
annsp(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-07 16:51:33
5okb???楼主怎么要扩这么长的片段啊,好像LA是办不到的,LA的说明书上写的是以λ DNA为模板是有效长度是35kb,人基因组为模板是17.5kb.其他的我也没做过,就不瞎说了~
一花一世界、一叶一菩提
2楼2013-05-07 12:02:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
annsp(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-07 16:51:42
50kb?你能扩出来才怪呢;
参考下文献是用cDNA还是全DNA,cDNA应该要短很多;如果内含子比较重要,那就没办法了
用真核还是原核与蛋白本身有关,比如有糖链之类的,必须要用真核,否则蛋白可能没活性
第三军团
3楼2013-05-07 15:05:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaolf

木虫 (著名写手)

胖虎爱唱歌

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
很明显楼主在做一件很有挑战性的事,希望成功之后来分享下经验啊。
我是胖虎,我是孩子王!
4楼2013-05-07 15:27:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 annsp 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂,求各位老师收留 +10 秋有木北 2026-03-14 10/500 2026-03-19 05:52 by anny19840123
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +5 陌の森林 2026-03-18 5/250 2026-03-18 22:18 by bingxueer79
[考研] 化学工程321分求调剂 +15 大米饭! 2026-03-15 18/900 2026-03-18 14:52 by haxia
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +6 孔志浩 2026-03-12 11/550 2026-03-17 14:41 by 周舟舟77
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 285化工学硕求调剂(081700) +9 柴郡猫_ 2026-03-12 9/450 2026-03-17 10:18 by Sammy2
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗? 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +5 ly3471z 2026-03-13 5/250 2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油!? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] [0860]321分求调剂,ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
信息提示
请填处理意见