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酵母文库构建
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| 最近在构建酵母文库，用clotech的试剂盒构建。用Qiagen 去gDNA的纯化试剂盒提细胞总RNA,浓度为0.9ug/ul,260/280=2.01，然后翻转录成单练DNA后LC-RCR,比较奇怪扩增后测浓度为580ug/ul，总量为95ul,但是纯化完后用两管和一管30ul水溶解后浓度只有114ng/ul。那哪些DNA都哪去了，纯化的时候是按试剂盒说明做的。完了之后转化Y187酵母结果，1:10稀释板上只长了10个左右酵母，涂到150mm大板子的有许多板子没长菌，有些长的很少，有的长的还凑活。凃菌的时候是用5mm玻璃珠凃菌，每5个板子恍匀一次，但是5个板子也有长和不长的，请问是什么原因啊？哪位高手能帮忙分析一下原因啊，谢谢！ |
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2楼2013-09-04 21:39:31