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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 真菌传代培养后抑菌活性会降低吗？
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)

[求助] 真菌传代培养后抑菌活性会降低吗？

不知道组里有没有做真菌的，我养的真菌第一次做抑菌试验的时候，效果很好，用的打孔法，那个时候也养了挺久了，不过基本上都不是保种了之后活化的，大概是纯化之后转接了两三次的样子。
  之后上摇床提发酵液，发酵液做了滤纸片法，效果不好。
  一个月前我又做了一次打孔法，完全无效，一点抑菌圈都没有；当时把常用的牛肉膏蛋白胨培养基换成了LB培养基，怀疑是培养基的问题，可能不大适合真菌生长。
  我查了一些文献，找不到用其他培养基的，设计到真菌的抑菌试验，指示菌是大肠杆菌和金葡的，都用的牛肉膏蛋白胨。
  我前天又做了一次，牛肉膏蛋白胨培养基，大肠杆菌和金葡，一个平板30微升菌液，1.5ml的离心管，两接种环的量。完全无效。
  我这次做的都是保种之后再接的，但长的还是很好，10个里只有一个长的有点变了。
  所以我相当的纠结啊，真菌养久了抑菌活性会丧失的吗？看了好多研究抑菌活性的文献，没有提到培养时间也是影响因素的。
  求高人赐教好么！！！
  真菌不好养啊，真心不想从头再来啊！！
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1楼 2013-05-02 18:17:26
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

空云不留痕

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
ggyy0911: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-05-17 00:43:06
菌种分为标准储藏菌株和工作菌株，你用来做实验的就用工作菌种；用来传代的就使用标准储藏菌株；如果用量大，可以一次性多传点工作菌株。
楼主可以梳理一下自己的试验：1. 培养基问题：LB一般用来培养细菌，真菌建议使用PDA（如果您参考的标准方法是LB，那就另当别论了）；2.菌种问题：除上述问题外，请问楼主菌种来源是否稳定，是ATCC的菌还是哪里的？活化方法是否按照标准要求进行？购买的菌种有没有做过相应特征鉴定，即如何确定你买的就是所需菌种；
3. 貌似还涉及到E.Coli和金葡，这两种细菌有没有变异或污染，比如该真菌只对E.Coli和金葡敏感，万一这两个细菌已经污染变成其他杂菌了，抑菌性能自然就改变了；
    暂时说这么多了，楼主还是列出可能的原因逐一排除。上面这些如果忽略掉，那么后续发酵试验做了也是白搭。
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6楼2013-05-03 12:49:10
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 马夫2011 at 2013-05-04 17:47:06
我以前的课题做的是真菌的，做的药敏是微量法做的。在每次做药敏前，菌株都需要活法复壮的，不知道你的问题是不是在这里。另外，我个人也感觉真菌一是容易出现污染，另外，容易出现变异，通常用最初保存的菌株活化复 ...

事实上我用的真的是第一批保存的菌种，我保种后剩下的同一批板子做的抑菌，很成功。但是再从种子里接出来的居然就不行了。
  你专业和我一样诶……我也是临床兽医的。
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10楼2013-05-05 23:50:55
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普通回帖

heyj1234

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能是菌种退化。重新活化！
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激情的时代
2楼2013-05-02 18:49:18
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空云不留痕

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励新虫应助交流！ 2013-05-02 21:31:33
按照中国药典规定，菌种传代不得超过五代，楼主是否传代数太多了？导致菌种退化或变异？新活化的菌种有没做鉴定？若污染到杂菌，影响后续传代！另外真菌一般都蛮好养，至少比细菌好养！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-05-02 21:23:52
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zhanqgao

禁虫 (知名作家)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
4楼2013-05-03 08:41:03
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 空云不留痕 at 2013-05-02 21:23:52
按照中国药典规定，菌种传代不得超过五代，楼主是否传代数太多了？导致菌种退化或变异？新活化的菌种有没做鉴定？若污染到杂菌，影响后续传代！另外真菌一般都蛮好养，至少比细菌好养！
...

真菌也规定不能传过五代？！那这个问题怎么避免呢？纯化之后保种，然后活化使用之后再次保种吗？因为保的种还是有可能出问题的啊，比如用的次数太多不够用了，或者活化取菌时不小心污染了之类。
  真菌确实可视性比较强，关键细菌长半天，真菌最少长5天啊！！
  此外我现在养的这一批还不涉及鉴定，我是准备提了发酵液之后，再去鉴定，关键就是它现在让我觉得它都变性了，再去鉴定不知道还有没有意义。
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5楼2013-05-03 10:39:19
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 空云不留痕 at 2013-05-03 12:49:10
菌种分为标准储藏菌株和工作菌株，你用来做实验的就用工作菌种；用来传代的就使用标准储藏菌株；如果用量大，可以一次性多传点工作菌株。
楼主可以梳理一下自己的试验：1. 培养基问题：LB一般用来培养细菌，真菌建 ...

我现在做的工作和你假定的是相反的，我是从植物中分离出真菌，纯化之后，再去确定它是什么菌株。没得到发酵液和菌丝之前，我没法提DNA，也就谈不上比较。相当于我现在在鉴定一株未知的真菌。
  用LB是因为抑菌试验里我需要培养细菌，只培养真菌的时候我都用的是PDA。
  细菌确实需要再检验一下了。
  非常感谢。
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7楼2013-05-03 16:59:27
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
真菌传代有可能会出现基因突变吧，我本科毕业实验做的是真菌抑菌的实验，现在没啥印象了
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Someone
8楼2013-05-03 22:20:56
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马夫2011

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我以前的课题做的是真菌的，做的药敏是微量法做的。在每次做药敏前，菌株都需要活法复壮的，不知道你的问题是不是在这里。另外，我个人也感觉真菌一是容易出现污染，另外，容易出现变异，通常用最初保存的菌株活化复壮会好一些！
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努力！努力！再努力！
9楼2013-05-04 17:47:06
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