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ggyy0911铁虫 (正式写手)
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[求助]
真菌传代培养后抑菌活性会降低吗？
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不知道组里有没有做真菌的，我养的真菌第一次做抑菌试验的时候，效果很好，用的打孔法，那个时候也养了挺久了，不过基本上都不是保种了之后活化的，大概是纯化之后转接了两三次的样子。 之后上摇床提发酵液，发酵液做了滤纸片法，效果不好。 一个月前我又做了一次打孔法，完全无效，一点抑菌圈都没有；当时把常用的牛肉膏蛋白胨培养基换成了LB培养基，怀疑是培养基的问题，可能不大适合真菌生长。 我查了一些文献，找不到用其他培养基的，设计到真菌的抑菌试验，指示菌是大肠杆菌和金葡的，都用的牛肉膏蛋白胨。 我前天又做了一次，牛肉膏蛋白胨培养基，大肠杆菌和金葡，一个平板30微升菌液，1.5ml的离心管，两接种环的量。完全无效。 我这次做的都是保种之后再接的，但长的还是很好，10个里只有一个长的有点变了。 所以我相当的纠结啊，真菌养久了抑菌活性会丧失的吗？看了好多研究抑菌活性的文献，没有提到培养时间也是影响因素的。 求高人赐教好么！！！ 真菌不好养啊，真心不想从头再来啊！！ |
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
ggyy0911: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-05-17 00:43:06
ggyy0911: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-05-17 00:43:06
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菌种分为标准储藏菌株和工作菌株，你用来做实验的就用工作菌种；用来传代的就使用标准储藏菌株；如果用量大，可以一次性多传点工作菌株。 楼主可以梳理一下自己的试验：1. 培养基问题：LB一般用来培养细菌，真菌建议使用PDA（如果您参考的标准方法是LB，那就另当别论了）；2.菌种问题：除上述问题外，请问楼主菌种来源是否稳定，是ATCC的菌还是哪里的？活化方法是否按照标准要求进行？购买的菌种有没有做过相应特征鉴定，即如何确定你买的就是所需菌种； 3. 貌似还涉及到E.Coli和金葡，这两种细菌有没有变异或污染，比如该真菌只对E.Coli和金葡敏感，万一这两个细菌已经污染变成其他杂菌了，抑菌性能自然就改变了； 暂时说这么多了，楼主还是列出可能的原因逐一排除。上面这些如果忽略掉，那么后续发酵试验做了也是白搭。 |
6楼2013-05-03 12:49:10
heyj1234
金虫 (职业作家)
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2楼2013-05-02 18:49:18
3楼2013-05-02 21:23:52
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4楼2013-05-03 08:41:03
20