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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何提高核酸杂交特异性？（各位大神点点这）
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黄小怪

铜虫 (初入文坛)

[求助] 如何提高核酸杂交特异性？（各位大神点点这）

问：如何提高核酸杂交特异性？
小白很急，请各位大神搭手相救
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你必须非常努力，才能看起来毫不费力
1楼 2013-05-02 16:52:03
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诸葛小汐

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
黄小怪(gyesang代发): 金币+2, 非常好的建议！ 2013-05-04 01:32:51
首先引物设计上就要保证比较严格的配对，如果是文献里面的最好在NCBI做下BLAST，自己设计的推荐PP5和oligo评估下。在做PCR过程中，温度越高对引物特异性要求越高，一般都可以计算出引物的退火温度，做个梯度筛选出最好的。如果引物提高温度特异性仍旧不好，可以试着加少许DMSO等，这些东西可以提高引物特异性。小生不才，都是个人实验心得，欢迎交流指点

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2013-05-04 01:10:14
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黄小怪

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 诸葛小汐 at 2013-05-04 01:10:14
首先引物设计上就要保证比较严格的配对，如果是文献里面的最好在NCBI做下BLAST，自己设计的推荐PP5和oligo评估下。在做PCR过程中，温度越高对引物特异性要求越高，一般都可以计算出引物的退火温度，做个梯度筛选出最 ...

多谢诸葛童鞋！
偶第一次在上面发帖，不知道怎么样才能把金币给你，你看一下，如果没有，请告知我哈！
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你必须非常努力，才能看起来毫不费力
3楼2013-05-04 09:33:00
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