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黄小怪

铜虫 (初入文坛)

[求助] 如何提高核酸杂交特异性?(各位大神点点这)

问:如何提高核酸杂交特异性?
小白很急,请各位大神搭手相救
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你必须非常努力,才能看起来毫不费力
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诸葛小汐

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
黄小怪(gyesang代发): 金币+2, 非常好的建议! 2013-05-04 01:32:51
首先引物设计上就要保证比较严格的配对,如果是文献里面的最好在NCBI做下BLAST,自己设计的推荐PP5和oligo评估下。在做PCR过程中,温度越高对引物特异性要求越高,一般都可以计算出引物的退火温度,做个梯度筛选出最好的。如果引物提高温度特异性仍旧不好,可以试着加少许DMSO等,这些东西可以提高引物特异性。小生不才,都是个人实验心得,欢迎交流指点

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2013-05-04 01:10:14
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黄小怪

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 诸葛小汐 at 2013-05-04 01:10:14
首先引物设计上就要保证比较严格的配对,如果是文献里面的最好在NCBI做下BLAST,自己设计的推荐PP5和oligo评估下。在做PCR过程中,温度越高对引物特异性要求越高,一般都可以计算出引物的退火温度,做个梯度筛选出最 ...

多谢诸葛童鞋!
偶第一次在上面发帖,不知道怎么样才能把金币给你,你看一下,如果没有,请告知我哈!
你必须非常努力,才能看起来毫不费力
3楼2013-05-04 09:33:00
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