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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SaII和BamHI双酶切切不开
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hermain

木虫 (小有名气)
请问楼主最后是怎么解决的呢？我最近也遇到这样的问题，很头疼啊！还请您赐教。
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11楼2013-05-04 19:55:38
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zhuqinjian

金虫 (小有名气)
重新连T载体再做了一下，然后再酶切就切开了；那个没切开的样品也送去测序了，测序结果还没出来，出来了就知道什么原因了
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坚定方向，坚持下去
12楼2013-05-05 11:29:25
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冰封之real

银虫 (初入文坛)
我也遇到过类似情况。你可以检查一下用的buffer是否合适，有些酶虽然可以与其他酶作双酶切，但在共同buffer里面活性会降低。我建议你可以分步酶切一下试试，虽然麻烦，但酶切效果好
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13楼2013-05-07 09:18:41
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我是钢镚

木虫 (正式写手)
使用通用引物进行测序最靠谱，反正最后你都要进行测序验证的。
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14楼2013-05-07 14:56:22
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zhuqinjian

金虫 (小有名气)
已经切出来了，谢谢大家
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坚定方向，坚持下去
15楼2013-05-07 22:07:35
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蝴蝶110

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 8601 at 2013-05-03 06:40:07
SalI 这个酶感觉活性不如其他酶。 可能你的DNA里面有些杂质，抑制了SalI的活性。我曾经遇到过这样的情况，做了几个miniprep, 用bamHI 和 XhoI 都能切开，用SalI 时有的能全部切开，有时只有很微弱的带子，有的压根切 ...

求助一份BamHI SalI的中文说明书，我买的是NEB公司的
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16楼2013-06-16 18:11:26
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8601

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 蝴蝶110 at 2013-06-16 04:11:26
求助一份BamHI SalI的中文说明书，我买的是NEB公司的...

不好意思。我在美国。我也只有英文的。
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17楼2013-06-17 11:10:00
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wangdezhou84

金虫 (小有名气)
用载体引物和目的片段引物试下，双酶切也没有条带确定酶没问题吗？
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ifyoucan'tmakeamistake,youcan'tmakeanything
18楼2013-07-03 16:08:29
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cherry_cao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by zhuqinjian at 2013-05-05 11:29:25
重新连T载体再做了一下，然后再酶切就切开了；那个没切开的样品也送去测序了，测序结果还没出来，出来了就知道什么原因了

那个没切开的测序结果对吗？我也遇到了一样的问题~
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19楼2017-03-04 14:29:42
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