24小时热门版块排行榜    

查看: 3635  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhuqinjian

金虫 (小有名气)

[求助] SaII和BamHI双酶切切不开

我用T载体与目的片段连接后,导入JM109中,用菌落PCR也能P出目的片段,提取质粒后PCR也能P出来,电泳跑出来的片段也正确(环状片段跑出来有3条带),但是用SaII和BamHI双酶切就是切不出来,只有一条带。求大神指导啊?是不是只是单酶切了啊?为啥双酶切切不出来呢?
回复此楼
坚定方向,坚持下去
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cherry_cao

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by zhuqinjian at 2013-05-05 11:29:25
重新连T载体再做了一下,然后再酶切就切开了;那个没切开的样品也送去测序了,测序结果还没出来,出来了就知道什么原因了

那个没切开的测序结果对吗?我也遇到了一样的问题~
19楼2017-03-04 14:29:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhuqinjian: 金币+5, 有帮助, 单酶切做了下,发现Sal I没有切开,哎不知道怎么回事 2013-05-02 11:01:09
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-02 12:01:23
分别做单切,确定是那个酶不能工作!此外,PCR的鉴定时候是否有加入阴性与阳性对照,我想担心你所看到的片段是都就是目的片段!希望对你有用!
2楼2013-05-02 10:20:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhuqinjian: 金币+3, 有帮助, 我是用捷瑞的试剂盒提的质粒,我觉得应该不是这个问题吧 2013-05-02 11:02:21
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-02 12:01:31
酶切之前,样品质粒要进行除酶,除盐,除乙醇等处理。一般就是酚氯仿抽提,技术要过关,不要在后面醇沉时留下太多的乙醇。上面说的单酶切验证酶是否失效是可行的,但是样品必须干净。内切酶很受离子和乙醇等物质影响的。
3楼2013-05-02 10:50:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhuqinjian: 金币+5, 有帮助, 的确是这样的,我考虑重新连T载体再做一下,然后再送去测序 2013-05-02 11:03:49
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-02 12:01:38
gyesang: 回帖置顶 2013-05-02 12:01:46
用载体上的引物对插入片段测序,最靠谱
4楼2013-05-02 11:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] FileCode能看出啥? +8 要乐观耀哥 2026-08-10 23/1150 2026-08-13 00:35 by 要乐观耀哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +8 majunge000 2026-08-10 9/450 2026-08-12 22:17 by 虫友是什么虫
[基金申请] 不应该看fileCode +5 且听虎啸 2026-08-12 6/300 2026-08-12 16:26 by Tide man
[基金申请] filecode +13 documentary 2026-08-10 15/750 2026-08-12 15:56 by 云上清扬
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
信息提示
请填处理意见