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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » t载体酶切问题
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将军的石头

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-29 00:00:12
我给你回了，让你看看ClaI是不是处在甲基化位点内，ClaI是不是被甲基化了，能把那一段序列发上来看看吗？
...

atgctgctccaaggtctggtcgtggctggaggagccagctacgtccttcaaaagaaagcaccacactactcactcggcttttggacaactgcattcgctttcctcttcatttacttcaccatcgcccagacatggcgcatcattgtctacccacgcttcttcagtcctcttcggcacttgccgcgccctggcggtggacactggctctgggaccaaaccatgaggatcctcaaggagcctacaggcagtcccttgcgtgattggattgacaatgtgccaaacactgggttaatcacatactctacctggttcgagccgcgagtactcgtgaccaatcccaaaggcctcgccgaggttcttgtgaccaaaaactacgactttgagaagccgaagcagtttagccaatctctaggaagatttctaggcatgggcatattgtttgccgagggcgacgaacacaagcgacaacggaaaaacctgatgcctgcctttgctttccgccacatcaaggacctgtacccaaccttttggagcaagtcgcgggagatggctcaggttctgtctgctaccatcaaggcaaagcccgacgccggcctagcggcagaggagaagatcaatgccgatgccgatgccgttcaacatgcgcctggggccattgaggtgtacgactggagctctcgtgccacgctcgacatcatcggcgtgtcaggcatggaccgcgacttcaactccctcaacgaccctgcaaataagctcaaccaaacctacaagaccatcttcaacacaggcagagtgggaaggttcatcagacttctggcaatattcgttcccatccgactcctgcgcctcctgccgttgaagcgcaatgctgacatgactgcagccagctcttacatcaagcaagtttgccgggatctcattgcgggaaaacgagagagactccatgttgagaagcagcgctccaaggcagacattgatattctttctgttgcactcgaatccggcggctttagtgacgaagatctcgttaaccaaatgatgacttttctcctcgcgggacacgaaacgactgccacggcaatggcctgggccgtgtacgagctctgcaaacgccccgaaacccaacagaaattacgcgaccaagttcgctccaaactcccttcgcttgaaggcgacatcactgccgcggaaatcgacaactgttcttacttgcaagccttctgcaacgaagttctccgagtgtggtctcccgttcccctgaccctgcgtgtcgccgcaagggacaccagcattctgggccaattcatcccaaagggcactcctgtgattctttgtccatgggccgtgaacttatccgagcagctctggggcgcagatgccaaagaattcaagccagagcgctggctcgacgccaacggccacacgaacaatcgcggatccgcagactccaactactctttcatgacatttttacacggtccgcgaagctgtattggccagaagtttgcacaggctgagtttgcgtgcctggttgcggcttgggtgagcagatttgagacgagattcgaggatggaggaccgctggctaggggagaagagccggactttgccacggaaatcacgacgaagccaaaggggggattgtgggtgcagttgaaggagattgagggacgtcgtcaagaggcttga
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11楼2013-04-29 00:07:21
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将军的石头

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-29 00:02:10
有，需要用到Dam-的菌株，比如JM110，把质粒转到这个菌里面，再抽质粒，就可以酶切开了
或者你重新设计引物啊，重新扩啊，很简单的事...

jm109行吗，我们实验室没有jm110
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12楼2013-04-29 00:10:03
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gyesang

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【答案】应助回帖

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11楼: Originally posted by 将军的石头 at 2013-04-29 00:07:21
atgctgctccaaggtctggtcgtggctggaggagccagctacgtccttcaaaagaaagcaccacactactcactcggcttttggacaactgcattcgctttcctcttcatttacttcaccatcgcccagacatggcgcatcattgtctacccacgcttcttcagtcctcttcggcacttgccgcgccctggcggtgga ...

你这个序列发的不对，我要的是，你设计引物合成的那个引物序列，这个发给我没用
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

将军的石头
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
13楼2013-04-29 13:58:46
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gyesang

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【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 将军的石头 at 2013-04-29 00:10:03
jm109行吗，我们实验室没有jm110...

jm109是不行的，你可以去查查大肠杆菌的基因型，找dam-的菌株都可以，你可以重新设计引物，重新扩啊
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
14楼2013-04-29 14:00:06
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将军的石头

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-29 13:58:46
你这个序列发的不对，我要的是，你设计引物合成的那个引物序列，这个发给我没用...

哦，是这样的，引物设计的时候没有加酶切位点，就想直接从t载体上找酶切位点，因为后面还需要跟另外两个不同的载体链接转酵母，所以就没涉及酶切位点，说来话长，反正弄得很郁闷，现在重新克隆连接t载体吧。谢谢你啊，学到很多东西，我是新手，刚做分子生物学，以后又不懂得还要请教了
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15楼2013-04-29 23:59:19
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人
小木虫人才好多呀，连质粒切不开都能找到答案，好厉害，学习了！
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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
16楼2013-09-14 21:45:56
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