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将军的石头

新虫 (初入文坛)

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[求助] t载体酶切问题

各位好，我的一个基因连到了t载体上，基因大小为1500左右，想用c l a 1和xho1双切，这个基因上没有两个点，但是过夜酶切后跑胶后只有一条带，大小倒是4200左右，酶都没有问题，怎么回事呢，万分感谢

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1楼 2013-04-27 12:57:00

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将军的石头

新虫 (初入文坛)

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送红花一朵

引用回帖:

13楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-29 13:58:46
你这个序列发的不对，我要的是，你设计引物合成的那个引物序列，这个发给我没用...

哦，是这样的，引物设计的时候没有加酶切位点，就想直接从t载体上找酶切位点，因为后面还需要跟另外两个不同的载体链接转酵母，所以就没涉及酶切位点，说来话长，反正弄得很郁闷，现在重新克隆连接t载体吧。谢谢你啊，学到很多东西，我是新手，刚做分子生物学，以后又不懂得还要请教了

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15楼2013-04-29 23:59:19

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gyesang

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【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
将军的石头(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-29 15:35:12

ClaI的酶切识别序列是AT^CGAT,对dam甲基化敏感，dam甲基化序列是GATC，看看你加的ClaI酶切位点前的碱基是不是G，如果是G的话，这个酶切位点就被甲基化了，从普通大肠杆菌菌株中提取的质粒，用ClaI是切不开的，我觉得你切不开的原因在此，希望反馈的信息

[ Last edited by gyesang on 2013-4-27 at 13:51 ]

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