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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用简并引物跑PCR跑不出条带，愁死了
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aoaoshch

木虫 (小有名气)
兼并引物不是都能扩增出条带的，只有与你的模版结合较好时才行。
建议多加点酶，温度Down到40试试。模版DNA可以煮5min在加到PCR体系中。
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21楼2014-01-09 20:05:23
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sj082csh

银虫 (小有名气)
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16楼: Originally posted by 失意女孩 at 2013-05-05 21:01:57
我最近在做霉菌基因的简并，已经简并出三个基因，我感觉还是引物最重要吧，我的是每次很多条带很密集都不知目的条带是哪一条。

我的dNTP是10mM的，所以只用了0.5μL
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22楼2014-01-13 14:44:40
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sj082csh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 啊虫木 at 2013-05-10 10:44:30
唔，好像是...

我的dNTP浓度是10mM，所以体积会少些~~
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23楼2014-01-13 14:48:59
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sj082csh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by Crescendo at 2014-01-09 18:11:16
朋友你好！看到你在的有关简并引物设计的帖子，想请教一下：我用codehop设计的几对引物为什么总是扩增不出来目的条带呢？我做的是普通pCR，用的酶是takara LA酶。你是怎么做的？具体怎么操作？谢谢！...

您好, 我之前用的是iCODEHOP设计的简并引物，不是用CODEHOP设计的。 iCODEHOP网站现在貌似打不开了，我没用CODEHOP设计过，它的界面不如icodehop友好，具体有什么差别我不太清楚。  我有3个基因都是用icodehop设计简并引物跑出条带。  我个人建议，如果您的目的基因的同源基因的核酸序列比较保守的话，不需要用它们设计引物的。可以直接从NCBI上下载序列，然后进行同源比对，在保守区域设计几对引物，存在的个别碱基的差异应该用简并碱基代码替代（简并度不要太高）。
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24楼2014-01-13 14:58:45
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sj082csh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
24楼: Originally posted by sj082csh at 2014-01-13 14:58:45
您好, 我之前用的是iCODEHOP设计的简并引物，不是用CODEHOP设计的。 iCODEHOP网站现在貌似打不开了，我没用CODEHOP设计过，它的界面不如icodehop友好，具体有什么差别我不太清楚。  我有3个基因都是用icodehop设计 ...

“它们”指的是icodehop和codehop
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25楼2014-01-13 15:00:08
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