| 查看: 3644 | 回复: 24 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
用简并引物跑PCR跑不出条带，愁死了
|
||
|
最近克隆一种药用真菌的漆酶基因，跑了四五次了，总是跑不出条带，除了maker啥也没有。PCR的退火温度每次都设置了10个梯度（最高55，最低45）。 简并引物（引物本身不知可不可行，求鉴定）： 引物1：5′-CA (C/T) TGGCA (C/T) GG (C/T) TTCTTCCA-3′ 引物2：5′-TGGCA (A/G) TGGA (A/G) GAACCACGG-3′ 加样体系（25μL）： 2.5μL 10×PCR Buffer（Mg2+） 2.0μL dNTP Mixture 1.0μL primerL1 1.0μL primerL2 2.0μL 模板 DNA 0.2μL ETaq 16.3 ddH2O 反应程序： 1. 94℃ 5min； 2. 94℃ 1min，50℃（有梯度，45-55） 45s，72℃ 2min，35 循环； 3. 72℃ 5min。 |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有70人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
16楼2013-05-05 21:01:57
2楼2013-04-26 09:48:48
3楼2013-04-26 09:53:28
4楼2013-04-26 10:06:20
