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用简并引物跑PCR跑不出条带，愁死了
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最近克隆一种药用真菌的漆酶基因，跑了四五次了，总是跑不出条带，除了maker啥也没有。PCR的退火温度每次都设置了10个梯度（最高55，最低45）。 简并引物（引物本身不知可不可行，求鉴定）： 引物1：5′-CA (C/T) TGGCA (C/T) GG (C/T) TTCTTCCA-3′ 引物2：5′-TGGCA (A/G) TGGA (A/G) GAACCACGG-3′ 加样体系（25μL）： 2.5μL 10×PCR Buffer（Mg2+） 2.0μL dNTP Mixture 1.0μL primerL1 1.0μL primerL2 2.0μL 模板 DNA 0.2μL ETaq 16.3 ddH2O 反应程序： 1. 94℃ 5min； 2. 94℃ 1min，50℃（有梯度，45-55） 45s，72℃ 2min，35 循环； 3. 72℃ 5min。 |
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