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shixiaba

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 金纳米粒子的标记

按照文献方法16nm金纳米粒子标记IgG和DNA(AuNPs调节至碱性后加IgG,反应20min,加入巯基DNA,摇5min后4摄氏度过夜),出现了下述问题:
标记好的金纳米粒子在高盐度下不会聚沉,第一次离心后可以重新分散,可第二次不论在水、含有0.05%吐温PBS或是在0.1%BSA中离心后发生贴附离心管壁的现象。
为了验证,做过只标记饱和量IgG的AuNPs,可以正常离心两次,第三次离心在上述三种体系中同样会贴壁。
IgG和DNA的双标文献中有很多报道,但是不知道为什么不能成功。求高人帮助。谢谢!
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chenzixuan

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这是表面的稳定剂被离心掉了吧 多大的转速?是柠檬酸钠吗?
himistu
2楼2013-04-25 08:48:44
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shixiaba

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chenzixuan at 2013-04-25 08:48:44
这是表面的稳定剂被离心掉了吧 多大的转速?是柠檬酸钠吗?

没错,AuNPs是用柠檬酸钠制的。但是表面稳定剂是什么啊?还真不太懂。我第一次做合成……求赐教~
3楼2013-04-25 09:22:24
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shixiaba

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chenzixuan at 2013-04-25 08:48:44
这是表面的稳定剂被离心掉了吧 多大的转速?是柠檬酸钠吗?

忘了说了,15000的转速。
4楼2013-04-25 10:19:20
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xiaobu0527

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
shixiaba: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 很有帮助~ 2013-04-25 11:08:57
你换个溶液,没有给它一个稳定的条件,它就聚集了。
纳米粒子表面会吸附带负电荷的柠檬酸根粒子,具有负电荷,在库伦排斥的作用下才能相对稳定存在在溶液中,当你离心完,加入其它的溶剂,纳米粒子表面的柠檬酸根粒子脱附,表面负电荷减少,纳米粒子间的排斥力减少,就会聚集。本来你的纳米粒子溶液是澄清的,但是你如果离心完再加其它溶液,它无法稳定,你会发现贴在壁上的已经是聚集体的,也就是它的粒径都变化了。
从能量的角度而言,纳米粒子是不稳定的,趋向于形成聚集体,所以必须给它吸附带电荷的离子,让它通过相互排斥稳定存在于溶液中,不至于沉淀。
5楼2013-04-25 10:57:34
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shixiaba

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xiaobu0527 at 2013-04-25 10:57:34
你换个溶液,没有给它一个稳定的条件,它就聚集了。
纳米粒子表面会吸附带负电荷的柠檬酸根粒子,具有负电荷,在库伦排斥的作用下才能相对稳定存在在溶液中,当你离心完,加入其它的溶剂,纳米粒子表面的柠檬酸根粒 ...

是不是我用偏碱性的溶液会好点?
6楼2013-04-25 11:08:40
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xiaobu0527

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by shixiaba at 2013-04-25 11:08:40
是不是我用偏碱性的溶液会好点?...

用什么溶液我觉得这个和你的实验有关。你之后的实验要控制pH或者离子强度吗?如果你之后的实验要用缓冲盐控制pH的话,不妨用这个缓冲盐来分散你的纳米粒子。如果你之后的实验不需要控制pH, 也不需要控制离子强度的话,就选用一种对你实验不影响的盐来分散你的纳米粒子。其实我觉得还是用缓冲盐比较好,一般生化实验都用缓冲盐的,很多实验结果都和pH有关的。
7楼2013-04-25 11:24:46
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shixiaba

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by xiaobu0527 at 2013-04-25 11:24:46
用什么溶液我觉得这个和你的实验有关。你之后的实验要控制pH或者离子强度吗?如果你之后的实验要用缓冲盐控制pH的话,不妨用这个缓冲盐来分散你的纳米粒子。如果你之后的实验不需要控制pH, 也不需要控制离子强度的 ...

好滴,知道啦。谢谢~
8楼2013-04-25 14:53:45
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